【摘 要】
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酚氧化酶(phenoloxidase,简称PO,EC.1.14.18.1)在昆虫的生长发育和内源性免疫过程中具有重要功能,如具有黑化或包被入侵的病原物、昆虫伤口的愈合等功能。酚氧化酶可以作为害
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酚氧化酶(phenoloxidase,简称PO,EC.1.14.18.1)在昆虫的生长发育和内源性免疫过程中具有重要功能,如具有黑化或包被入侵的病原物、昆虫伤口的愈合等功能。酚氧化酶可以作为害虫控制中一个潜在的作用靶标,通过开发酚氧化酶抑制剂,对于害虫绿色防控和环境生态安全提供新思路。本论文利用植物源的槲皮素和微生物农药球孢白僵菌处理小菜蛾,通过制备小菜蛾两个酚氧化酶基因的多克隆抗体,研究不同处理对酚氧化酶蛋白表达水平的影响。酚氧化酶及其抑制剂也一直是国内外科学家研究的热点。本论文以小菜蛾为研究对象,在制备获得小菜蛾PxPPO1和PxPPO2基因抗体的基础之上,利用蛋白质印迹技术(Western Blot)研究了槲皮素和球孢白僵菌(Beauveria bassiana)处理小菜蛾后,小菜蛾酚氧化酶蛋白翻译表达水平的相对变化,从而来探讨外来效应物对酚氧化酶基因在翻译水平上的影响。主要结果如下:1.成功制备获得小菜蛾PxPPO1和PxPPO2基因的多克隆抗体。2.分别对内参基因β-actin以及目的基因PxPPO1和PxPPO2进行了 Western Blot曝光饱和分析,根据上样量与信号饱和点出现的时间,确定Western Blot试验中上样量为 10μg。3.采用微量点滴法,用不同浓度槲皮素处理小菜蛾3龄幼虫,处理不同时间后,PxPPO1和PxPPO2基因翻译相对表达量随槲皮素浓度升高而明显减少。4.采用浸渍法,用球孢白僵菌侵染小菜蛾3龄幼虫,成功侵染不同时间后,PxPPO1和PxPPO2基因翻译相对表达量在处理2h时比对照处理提高,在6h、12h、24h和48h时蛋白表达量均比对照处理减少。
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