苏云金芽胞杆菌与环境微生物的相互作用研究

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苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis, Bt)对害虫毒力强、对非靶标生物安全,已经发展成为应用最为广泛的微生物杀虫剂。本文针对Bt杀虫剂在害虫防治过程中可能受到土壤、植物根叶表面微生物和昆虫肠道微生物的作用而影响其发挥毒力这一问题展开研究。研究内容包括:Bt分别与有益细菌枯草芽胞杆菌、植物叶表有害真菌、可培养的蛴螬肠道微生物三种环境微生物的相互作用。主要结果如下:Bt与枯草芽胞杆菌的相互作用:平板对峙十字交叉划线法结果显示92株本实验室保存的Bt菌株与B916-gfp工程菌的相互作用关系包括三种:74%Bt菌株被B916-gfp抑制,20%Bt菌株与B916-gfp互不抑制,6%Bt菌株与B916-gfp互相抑制;平板对峙杯碟法结果显示,80%Bt菌株受到B916-gfp抑制;液体培养基共培养法结果显示,在培养前期,Bt生长速度较快,B916-gfp生长较缓慢,但在培养后期,经涂板培养发现,平板上90%以上均为B916-gfp,推测可能是B916-gfp在生长后期产生了大量抗菌物质,使Bt不能继续生长。荧光强度检测结果表明,在整个过程中Bt菌株基本不影响B916-gfp绿色荧光蛋白表达。以上三种对峙培养方法说明多数Bt菌株会受到枯草芽胞杆菌B916-gfp的抑制作用。本研究不仅明确了Bt与Bs之间的相互作用关系,而且对Bt杀虫剂在实际应用中尽量避免与抗病制剂枯草芽胞杆菌的共同使用具有指导意义。Bt与植物叶表有害真菌的相互作用:获得了一株对稻瘟病菌、玉米炭疽病菌均具有较强拮抗作用的PS7-f4菌株,对该菌株进行了形态观察、种属鉴定、质粒图谱及杀虫活性分析,结果表明该菌株(浓度为108cfu/mL)能使73.3%水稻二化螟和80%亚洲玉米螟死亡,存活试虫表现为生长抑制。本研究表明部分Bt菌株对植物病原菌具有抑制作用,因此,进一步筛选获得既抗虫又抗病的Bt菌株,可以达到病虫兼治的生防效果。Bt与可培养的蛴螬肠道微生物的相互作用:本研究共从三种蛴螬肠道中分离出可培养的细菌32株,鉴定其分为14个属;对峙生长结果表明多数蛴螬肠道细菌对Bt生长具有抑制作用,推测这可能是Bt杀虫剂对蛴螬作用迟缓的原因之一;蛴螬肠道细菌培养上清液对Bt杀虫蛋白(Cry8Ea)作用结果显示多数肠道细菌培养上清液对Bt杀虫蛋白无明显影响,少部分有一定消化作用;蛴螬肠道细菌对实验室常用抗生素的敏感性分析结果表明多数蛴螬肠道细菌对抗生素敏感。本研究结果表明蛴螬肠道微生物可能会影响Bt在蛴螬体内的增殖,这对未来防治蛴螬Bt杀虫剂的改进有重要意义。本文研究了Bt杀虫剂在害虫防治过程中与三种环境微生物的相互作用,对其在生态环境中受生物胁迫的影响进行了分析,为Bt杀虫剂的改进及应用提供了理论指导。
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