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目的:以体外培养的心肌成纤维细胞为标本,观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)与结缔组织生长因子(CTGF)表达的时-量效应,探讨AngⅡ-CTGF途径在心肌纤维化中的作用;用CTGF反义寡核苷酸、肝细胞生长因子(HGF)对AngⅡ的诱导作用进行干预,从胶原合成、降解、抑制降解等多个角度就其抑制心肌纤维化的机制作初步探讨,为临床防治高血压心肌重塑提供新思路.方法:差速贴壁法分离新生SD大鼠心肌成纤维细胞(CFs),免疫组化法对细胞进行鉴定.不同浓度的AngⅡ(10<-8>、10<-7>、10<-6>、10<-5>M)刺激CFs 48h,再选浓度10<-6>M分别作用6h、12h、24h、48h、72h得出AngⅡ对CTGF表达作用的时量关系,用AngⅡ受体拮抗剂Losartan抑制AngⅡ-CTGF信号通路.选10<-6>M AngⅡ作诱导浓度,分别与HGF、CTGF反义寡核苷酸、CTGF正义寡核苷酸、CTGF错义寡核苷酸共同孵育48h,采用MTT法测CFs生长增殖,羟脯氨酸法测胶原含量,RT-PCR法分别测CTGF、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、TIMP-1、MMP-1 mRNA的表达,免疫印迹(western-blot)法测CTGF蛋白水平的表达,用阳离子脂质体介导寡核苷酸转染CFs,荧光倒置显微镜观察FITC荧光标记的寡核苷酸转染率及细胞生长状态,光镜、扫描及透视电镜观察细胞形态学变化.结论:(1)、AngⅡ可刺激CFs增殖,上调Ⅱ型胶原、Ⅲ型胶原、TIMP-1及下调MMP-1 mRNA的表达,增加胶原合成、抑制降解,促进心肌纤维化的发生.(2)、AngⅡ以浓度-时间依赖的方式促进CFs CTGF的表达,其受体拮抗剂Losartan可大部分阻断AngⅡ-CTGF通路,拮抗心肌纤维化.提示AngⅡ可能通过AT<,1>受体介导机制上调CFs中CTGF的形成,AngⅡ刺激下产生的CFs CTGF mRNA和蛋白水平表达上调,可能是心肌纤维化传导通路中的关键环节.(3)、CTGF反义寡核苷酸、HGF均可显著抑制AngⅡ对CFs的诱导效应,可能通过抑制CFs增殖,下调CTGF表达,重调MMP-1/TIMP-1的平衡等途径减少胶原合成、促进降解,从而抑制心肌纤维化.提示HGF和CTGF在心肌纤维化过程中是一对拮抗生长因子,HGF是一种重要的抗心肌纤维化因子,对AngⅡ起反向调节作用;CTGF反义寡核苷酸可序列特异性地阻断CTGF介导纤维化的效应,可能是逆转AngⅡ所致心脏间质重构的新途径.(4)、提示CTGF在抗心肌纤维化治疗中可能是一个新的靶蛋白,为进一步的体内实验和将CTGF反义寡核苷酸、肝细胞生长因子作为新的治疗措施应用于心肌重塑治疗提供了初步的实验基础.