树突状细胞肿瘤疫苗抗胃癌作用的实验研究

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目的:胃癌是临床常见恶性肿瘤,经根治性手术、化疗及放疗等治疗后患者预后仍较差。树突状细胞(Dendritic cells、DCs)是近年来肿瘤生物治疗研究的新热点,实验研究及临床应用研究正广泛的进行,但有关DCs与胃癌的研究报道尚较少。我们以往的研究发现,负载胃癌抗原的DCs疫苗体外可有效杀伤胃癌细胞。本实验在胃癌裸小鼠移植瘤模型上,进一步研究DCs肿瘤疫苗的抗胃癌效应,同时探讨DCs分离培养方法和DCs肿瘤疫苗的制备、应用途径及抗胃癌作用的可能机制。方法:从小鼠骨髓细胞中利用粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素4(IL-4)在体外使用贴壁法定向诱导分化出DCs,以液氮冻融法制备肿瘤抗原刺激DCs制备肿瘤疫苗,并进一步诱导产生抗胃癌免疫效力。建立胃癌细胞株SCG7901裸小鼠移植瘤模型,观察DCs肿瘤疫苗对其肿瘤生长、细胞周期、细胞凋亡、血清VEGF以及肿瘤病理组织学的影响。结果:(1) 得到大量具备典型光镜及电镜形态特征、强烈同源T刺激增殖功能的DCs,高表达CD1a(84.7%)、CD11c(82.3%)、CD40(54.8%)及CD80(74.3%)。(2) DCs肿瘤疫苗CD80表达可高达90.4%,能有效诱导小鼠产生肿瘤抗原特异的细胞免疫力。经静脉和腹腔应用途径的免疫激发能力显著高于经腹股沟皮下途径。(3) DCs肿瘤疫苗能诱导显著的抗胃癌免疫效应,表现在抑制肿瘤生长,治疗组终末肿瘤体积为1.41±0.37cm3,显著小于对照组(2.36±0.32cm3,P<0.01 )。抑制肿瘤细胞增殖,治疗组肿瘤细胞S期比例为<WP=8>14.7%±5.7%,增殖指数为27.8±7.5,显著低于对照组(33.9%±3.5%,38.7±5.7,P<0.01 )。促进肿瘤细胞凋亡,治疗组肿瘤细胞凋亡率为56.2%±14.1%,显著高于对照组(16.8%±7.5%,P<0.01 )。降低血清VEGF含量,治疗组为240±173pg.ml-1,显著低于对照组(790±221pg.ml-1,P<0.01 )。影响肿瘤病理组织学,治疗组与对照组相比,肿瘤组织内有较明显水肿、出血、坏死灶,且肿瘤浸润淋巴细胞及凋亡改变的肿瘤细胞较对照组显著增多(P<0.01 )。结论:胃癌抗原特异性DCs肿瘤疫苗有高效抗胃癌作用,可通过促进胃癌细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖、降低肿瘤细胞VEGF分泌等机制,抑制肿瘤生长,促进肿瘤坏死。DCs肿瘤疫苗可作为临床肿瘤生物治疗的一种有效方法。
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