【摘 要】
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红髓生成因子(POKerythroidmyeloidontogenicfactor，Pokemon)是一种新近发现的在多种肿瘤中高表达的原癌基因，可以抑制抑癌基因ARF的表达。 本课题的目的在于研究Pokemon对M
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红髓生成因子(POKerythroidmyeloidontogenicfactor，Pokemon)是一种新近发现的在多种肿瘤中高表达的原癌基因，可以抑制抑癌基因ARF的表达。
本课题的目的在于研究Pokemon对MCF-7乳腺癌细胞增殖的影响，探究Pokemon基因转录调控的机制。构建Pokemon表达质粒，将其转染到MCF-7细胞中，通过MTT、平板克隆形成能力实验观察到Pokemon可以促进MCF-7细胞的增殖。构建一系列不同长度的Pokemon启动子荧光素酶报告基因载体，分别转染这几种报告基因载体到HepG-2和293T细胞中，通过双荧光素酶报告基因检测法确定了Pokemon基因转录起始位点上游1000bp为Pokemon启动子的核心调控区域。利用TFSEARCH程序发现Pokemon启动子的核心调控区域上存在两个GC-box的顺式作用因子，通过双荧光素酶报告基因检测法、突变分析证明这两个GC-box对Pokemon启动子活性起重要的作用。而Sp1是GC-box对应的反式作用因子，利用双荧光素酶报告基因检测法、突变分析、RT-PCR、Westernblot及ChIP等实验技术验证了反式作用因子Sp1可以通过GC-box上调Pokemon启动子活性，促进Pokemon基因的表达。Pokemon基因表达调控机制的明晰对明确Pokemon在肿瘤发生和发展过程中的作用研究将具有重要意义。
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