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中华蜜蜂是我国独特的本土蜂种,具有重要的经济价值和社会效益。然而,由于各种外界胁迫的影响,其生存受到严重威胁,种群数量不断降低。为了更好地保护中华蜜蜂这一珍贵的种质资源,利用分子生物学手段研究其体内的抗逆相关基因势在必行。丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶(MAP kinase phosphatases,MKPs)和载脂蛋白D(Apolipoprotein D,ApoD)能够参与细胞对多种刺激的响应,在生长发育、免疫反应、氧化应激以及各种疾病相关的生理反应过程中都扮演着重要角色。本研究以中华蜜蜂为实验材料,分离得到了AccMKP3和AccApoD两个基因,并对其进行了一系列的功能分析。主要研究结果如下:(1)通过RT-PCR的方法获得AccMKP3和AccApoD基因的编码区序列。AccMKP3基因的编码区序列长度为1203bp,编码400个氨基酸,预测其蛋白分子量和等电点分别为43.9kDa和4.90。AccApoD基因的编码区序列为714bp,编码237个氨基酸,预测其蛋白分子量和等电点分别为27.7kDa和8.42。(2)通过氨基酸序列比对和进化树分析发现,MKP3和ApoD的序列都在不同昆虫间高度保守,并且中华蜜蜂AccMKP3和AccApoD分别与意大利蜜蜂中的MKP3和ApoD亲缘关系最为接近。启动子序列分析发现,AccMKP3和AccApoD的启动子区域包含多种与生长发育和应激反应相关的转录因子结合位点。基因组结构分析发现,AccMKP3和AccApoD均含有4个外显子和3个内含子。(3)通过qRT-PCR的方法对AccMKP3和AccApoD进行发育和组织特异性表达分析,结果发现这两个基因在中华蜜蜂的各个发育时期都有表达,其中AccMKP3在白眼蛹期表达量最高,AccApoD在预蛹期表达量最高。另外,两个基因在中华蜜蜂的多个组织都有表达,其中AccMKP3在中华蜜蜂的胸部表达量较高,而AccApoD在中华蜜蜂头部及胸部的表达量都比较高。(4)通过qRT-PCR的方法对两个基因在不同胁迫条件处理下的表达模式进行分析,结果显示,AccMKP3和AccApoD明显受到温度、紫外线、重金属和农药等胁迫条件的诱导,表明这两个基因在中华蜜蜂抵抗环境胁迫的应激保护过程中发挥重要作用。(5)通过抑菌实验对重组AccMKP3蛋白和重组AccApoD蛋白的特性进行分析,结果发现两个蛋白的过表达均使大肠杆菌对氧化胁迫更敏感,表明这两种蛋白可能具有一定的抗菌活性。(6)利用RNAi技术在中华蜜蜂体内分别将AccMKP3和AccApoD基因沉默后,发现一些抗氧化基因的转录水平发生明显变化,并且抗氧化酶POD、SOD和CAT的酶活性明显增加,表明这两个基因在维持中华蜜蜂体内的氧化还原平衡过程中扮演着重要角色。