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第一部分:淋巴细胞共刺激分子B7-H1及其受体PD-1在鼻息肉组织的表达目的探讨鼻息肉患者淋巴细胞共刺激分子B7-H1及其受体PD-1的表达和意义,探讨其与鼻息肉发病机制的关系。方法对CRSsNP组11例,CRSwNP组17例患者,包括对照的中鼻甲组织11例,采用实时定量PCR检测共刺激分子B7-H1及其受体PD-1的基因的表达差异;Western Blotting验证其蛋白水平的表达差异,并用免疫荧光对其表达进行组织鉴定。结果慢性鼻窦炎(CRSsNP和CRSwNP)患者组的局部病变组织B7-H1/PD-1mRNA表达差异有显著性,P＜0.05或P＜0.01,分别高于对照的中鼻甲组织,P＜0.05或P＜0.01;CRSsNP与CRSwNP之间B7-H1/PD-1 mRNA表达无显著性差异,P＞0.05;Western Blotting验证其蛋白水平的表达趋势与实时定量PCR检测的基因水平一致。免疫荧光的结果显示CRSwNP的息肉组织B7-H1和PD-1阳性细胞数明显高于对照的中鼻甲组织,差异有显著性,P＜0.01。结论淋巴细胞共刺激分子B7-H1/PD-1在鼻息肉患者中表达增加,可能在其发病机制中起重要作用,确切调控机制有待进一步研究。第二部分:鼻息肉组织局部免疫微环境的研究第一节鼻息肉组织免疫细胞免疫表型的检测目的本实验选择CRSsNP和CRSwNP的两组病例,应用流式细胞的技术,对局部病变组织与他们相应的外周血,进行淋巴细胞免疫表型的研究,以探讨慢性鼻窦炎的局部病变组织,尤其是鼻息肉组织,是否存在局部黏膜免疫系统的可能,以期更好地闸明鼻息肉的免疫学发病机制,以期找到治疗的新靶点。方法28例慢性鼻窦炎病例分为两组,其中包括CRSsNP组11例,CRSwNP组17例,并取年龄与性别相匹配的正常人的外周血。新鲜手术标本和外周血制备单细胞悬液,流式细胞仪测定局部病变组织的浸润的免疫细胞免疫表型,对28例CRS患者的外周血、局部病变组织及11例健康对照组的外周血,采用流式细胞仪进行T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞B7-H1和T淋巴细胞PD-1的表达水平进行检测与分析,测得的阳性细胞百分率用(?)±s表示,应用SPSS15.0进行分析,组间比较用方差分析(one way ANOVA),若组间方差不齐,采用秩和检验;组内比较用配对样本t检验,以P＜0.05为差异具有显著性的标准。结果慢性鼻窦炎患者(CRSsNP和CRSwNP)两种亚型的外周血与局部病变组织中均存在T淋巴细胞亚群的差异,局部病变组织的CD4~+T细胞的数量低于患者的外周血(p＜0.01),而CD8~+T细胞数量高于患者的外周血(p＜0.01),CD4/CD8比例明显倒置(p＜0.01),两组患者外周血与正常对照组之间差异无统计学意义(p＞0.05)。两组慢性鼻窦炎患者(CRSsNP和CRSwNP)B淋巴细胞B7-H1的表达水平:局部病变组织表达最高,患者外周血其次,正常对照组表达最低;T淋巴细胞PD-1的表达水平:CRS的局部病变组织表达最高,患者外周血其次,正常对照组表达最低。CRS的局部病变组织的B淋巴细胞与T淋巴细胞B7-H1/PD-1表达上调,明显高于患者外周血组和健康对照组(p＜0.01);与健康对照组相比较,鼻息肉患者的外周血B淋巴细胞和T淋巴细胞B7-H1/PD-1表达增加(p＜0.01)。统计学分析,CRSsNP与CRSwNP相比,B7-H1/PD-1的表达水平无显著差异。CD3~+T细胞,CD16~+CD56~+(NK)细胞在各组之间的比较无显著性差异(p＞0.05)。结论慢性鼻窦炎(CRSsNP和CRSwNP)两种亚型的患者外周血与局部病变组织中存在T淋巴细胞亚群和B7-H1/PD-1信号通路表达的差异。第二节:鼻息肉组织细胞因子的研究目的本实验选择同前的CRSwNP的一组病例,应用流式细胞的技术,对鼻息肉组织和相应的外周血,进行细胞因子的研究,以探讨鼻息肉组织是否存在局部的免疫系统的可能,以期更好阐明CRSwNP的免疫学发病机制。方法17例CRSsNP患者的新鲜鼻息肉手术标本取自鼻内镜手术术中,所有这些患者的鼻息肉标本制备单细胞悬液,流式细胞仪测定IFN-γ细胞和IL-10阳性细胞百分率,所有数据以均数±标准差(用(?)±s)表示,采用SPSS15.0进行分析,使用配对样本t检验,以P＜0.05为差异具有显著性的标准。结果CD4~+T细胞分泌IFN-γ的阳性细胞在患者鼻息肉组织与相应的外周血的百分比分别是34.64%±2.94%和11.98%±1.36%;CD8~+T细胞分泌IFN-γ的阳性细胞在鼻息肉组织与相应的外周血的百分比分别是55.14%±4.04%和24.17%±2.88%;CD4~+T细胞分泌IL-10的阳性细胞在鼻息肉组织与相应的外周血的百分比分别是4.75%±0.75%和1.55%±0.25%;CD8~+T细胞分泌IL-10的阳性细胞在鼻息肉组织与相应的外周血的百分比分别是6.70%±0.66%和2.75%±0.40%。结论统计学分析显示CD4~+T和CD8~+T细胞分泌IFN-γ和IL-10的水平在局部鼻息肉组与相应的外周血相比都有显著差异(p＜0.05)。