白色普氏菌YIM 90005<'T>四氢嘧啶合成相关基因的克隆与分析

• 作 者: 李岩
• 机 构: 云南大学
• 出 处: 云南大学
• 发表日期: 2010年期
• 关键词: 高盐环境 耐盐放线菌 相容性溶质 普氏菌 基因克隆 四氢嘧啶

盐湖、盐矿、晒盐场、腌制食品表面等都是极端高盐环境，这些高盐环境中有大量的耐盐或嗜盐微生物存在。它们是极端环境微生物中的一个重要的类群，具有极为特殊的生理结构和代谢机制，能产生胞外多糖及其他多聚物，酶活性很特殊，也产生抗生素、胰岛素、维生素、小分子游离氨基酸类物质等。此外，嗜盐菌产生的淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶、脂肪酶等在食品工业以及污染修复方面应用价值很大。　　
这些微生物之所以能适应外界的高渗环境造成的高渗透压胁迫，是因为这些微生物胞内能积累一种称为相容性溶质的物质来执行调节胞内外两侧渗透压和渗透保护功能。这类物质属于极性较大的易溶于水的低分子量的有机化合物，包括糖类、氨基酸类、甜菜碱类和四氢嘧啶类等。　　
目前已经被广泛研究耐盐机理的嗜盐或耐盐类群都为细菌形态，对于经典的丝状产孢放线菌的耐盐机理的研究尚少，由于该类菌的丝状细胞的接触面积比球状细胞更大，渗透压的调节可能会与球状、杆状的菌体有所不同，因此对其耐盐机理的研究有很大的理论意义。　　
本论文对经典的丝状产孢极端耐盐放线菌白色普氏菌YIM90005T进行了不同盐浓度培养下胞内氨基酸及四氢嘧啶的精确定量，研究结果发现该菌积累大量的四氢嘧啶，谷氨酸。通过CODEHOP设计简并引物，并用GenomeWalkingKit扩增上下游片段，克隆到四氢嘧啶合成相关基因ectABC及其上下游调控序列及5-羟基四氢嘧啶合成相关基因ectD，并对不同盐浓度下ectD的表达量进行了相对定量，综合实验结果对耐盐放线菌白色普氏菌YIM90005T适应高盐环境的机制进行了讨论。