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目的:建立实验自身免疫性脑脊髓炎(Experimental autoimmune encephalomyelitis)动物模型,此后分出两组分别在此模型基础上阻断A1受体和P2Y1受体,用苏木-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法,取小鼠脑、颈、腰和骶等部位进行HE染色,观察小鼠脑和脊髓组织中炎症反应和病变位置;并用双抗体夹心ELISA法定量检测小鼠血清中IL-6、IL-17、IL-27和IL-35炎症因子的分泌情况。用此实验来探讨益肾达络饮对EAE小鼠血清中CD4+T细胞免疫调节的作用。方法:选用6-8周龄的雌性C57BL/6小鼠72只,随机分为空白组(n=12)、中药组(n=12)、激素组(n=12)、模型组(n=12)、P2Y1受体组(n=12)和A1受体组(n=12)。空白组12只小鼠正常饲养,不做任何处理。其余五组60只C57BL/6小鼠均制作EAE模型,根据以前经验用MOG33-55多肽和百日咳菌制备EAE小鼠模型,将MOG33-55干粉加入适量蒸馏水制备成水溶液,将MOG33-55水溶液100ul和完全弗氏佐剂(含结核杆菌400ug)100ul按体积1:1的比例混合,制备成油包水混合物,经过40分钟不停混合,待滴入自来水中不散开,说明已充分乳化,将充分乳化的MOG33-55为油包水的抗原,此油包水需现用现配。D0天制备好油包水抗原,每只小鼠取200ul油包水抗原经小鼠皮下四点注射,每点50ul。腹腔注射百日咳菌液,每只小鼠100ul。48小时后,进行第二次百日咳菌液腹腔注射,每只小鼠100ul。按Weaver,s15分评分原则进行临床症状评分,运用HE染色法检测炎症病位和判定疾病严重程度,并用ELISA法检测各组小鼠IL-6、IL-17、IL-27和IL-35表达的情况。结果:1、EAE小鼠模型:除空白组其余组小鼠均发病,发病率为83.33%,症状可见食欲减少,活动性差,喜静,聚堆现象出现,尾巴和四肢无力,严重者可以出现尾巴全瘫和后下肢全瘫,甚至可以出现死亡。最高临床评分可达15分;空白组发病临床症状均为0分。2、用HE染色方法检测小鼠脑和脊髓中炎症,发现发病的小鼠脑和脊髓中均有炎症表现。3、ELISA法检测结果表明:分别测IL-6、IL-17、IL-27和IL-35四个炎症因子,发现IL-6炎性因子模型组分泌最少,激素组分泌最多;IL-35中A1受体组分泌最少,中药组分泌最多,与EAE小鼠临床评分呈负相关;其中IL-17炎性因子P2Y1组检测最多,中药组最少;IL-27炎性因子激素组检测最少,A1受体组检测最多;与EAE小鼠临床评分程正相关。结论:炎症是影响EAE小鼠致病的重要因素,主要以神经系统(CNS)炎症为主,影响机体活动。益肾达络饮对EAE小鼠有积极的治疗作用,可以使致炎因子IL-27和IL-17分泌减少,降低临床评分,减轻炎症损伤程度。反之可以使IL-6和IL-35抑炎性因子增多,抑制致炎因子,降低临床评分,减轻炎症损伤程度。益肾达络饮对CD4+T细胞免疫积极的调节作用。