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目的：构建DJ-1真核表达载体，筛选DJ-1稳定高表达的H9c2心肌细胞系；在此基础上，探讨DJ-1高表达能否对抗模拟缺血再灌注（sI/R）所诱发的氧化应激损伤，并进一步探求其可能的机制。方法：1.根据大鼠DJ-1基因序列（NM057143.1, CDS298867），设计特异性克隆引物，提取大鼠心肌样细胞系H9c2细胞总RNA，应用RT-PCR方法获取DJ-1全长cDNA，克隆至真核表达载体pFLAG-CMV-4，构建DJ-1真核表达重组质粒（pFLAG-CMV-4-DJ-1），应用菌落PCR及DNA测序进行鉴定，确认后转染H9c2细胞，经G418选择性培养筛选出两株DJ-1稳定高表达的H9c2细胞系（H9c2/DJ-1-A和H9c2/DJ-1-B），并通过Western blot测定稳定转染细胞中DJ-1蛋白的表达而加以鉴定，同时筛选稳定转染pFLAG-CMV-4空载质粒的H9c2细胞系（H9c2/Sham）作为对照用于后续细胞实验；2.各取未转染的H9c2细胞、阴性对照的H9c2/Sham细胞、DJ-1高表达的H9c2/DJ-1-A及H9c2/DJ-1-B细胞分为对照组（Control）和模拟缺血再灌注组（sI/R）。实验处理后，利用MTT法检测各实验组细胞存活率；按试剂盒说明测定各组细胞内LDH漏出量、MDA含量及抗氧化物酶CAT、SOD和GPx的活性；流式细胞术检测各组细胞内ROS浓度的变化；RT-PCR和Western blot分别检测各组细胞内抗氧化物酶CAT、MnSOD和GPx的mRNA及蛋白表达水平的变化。结果：1.通过基因测序鉴定证实，DJ-1真核表达重组质粒pFLAG-CMV-4-DJ-1构建成功；2. Western blot检测表明稳定筛选的H9c2/DJ-1-A和H9c2/DJ-1-B细胞系中DJ-1蛋白表达与未转染H9c2细胞比较分别提高了2.6和2.5倍；3.未转染H9c2细胞及H9c2/Sham细胞经sI/R处理后，细胞存活率均明显下降、LDH漏出量显著增加、细胞内MDA含量升高，同时细胞内ROS含量显著增加，CAT、SOD及GPx的酶活性下降，与相应的Control组比较均具有显著性差异（P<0.01）。然而，DJ-1高表达的H9c2/DJ-1-A和H9c2/DJ-1-B细胞经sI/R处理后，细胞生存率较未转染H9c2细胞的sI/R组明显上升、LDH漏出量显著降低；同时，细胞内ROS及MDA含量减少、抗氧化酶SOD、GPx及CAT酶活性上升，与未转染H9c2细胞的sI/R组比较均具有显著性差异（p<0.01），表明DJ-1高表达的H9c2细胞对sI/R所致的氧化应激损伤具有一定的抵抗力。此外，RT-PCR及Western blot结果显示DJ-1高表达的H9c2/DJ-1-A和H9c2/DJ-1-B细胞内抗氧化酶MnSOD、GPx、CAT的mRNA及蛋白的表达均明显上调，与未转染H9c2细胞比较均存在显著性差异（p<0.01）。结论：1.成功构建了pFLAG-CMV-4-DJ-1重组质粒，建立了DJ-1稳定过表达的H9c2/DJ-1-A和H9c2/DJ-1-B细胞系，为进一步研究DJ-1功能奠定基础；2. DJ-1稳定高表达能对抗sI/R诱发的氧化应激损伤，其机制可能是通过上调抗氧化酶（MnSOD、CAT、GPx等）的表达，从而协同加强细胞内抗氧化防御能力而得以实现。