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植物内生真菌能够产生多种多样的具有生物活性的次生代谢产物，是寻找新型抗肿瘤药物的新途径。楸树内生真菌 FSN002是从胡桃楸树皮组织内部分离出来的木霉属真菌，其发酵液具有很强的抗肿瘤的作用。本论文通过楸树内生真菌 FSN002原生质体的制备和再生及其抗肿瘤活性成分楸灵素的分离两个方面分别进行研究。 楸树内生真菌 FSN002原生质体制备与再生的合适条件为：菌丝培养18小时，采用0.8 mol/L KCl作为渗透压稳定剂，浓度为20 mg/mL的Glucanex酶液，在28℃，100 rpm转速振荡酶解6小时，原生质体产量可达到6×107个/毫克菌丝。通过荧光素二醋酸酯（FDA）染色表明所制备的原生质体活力率可达到83％。原生质体的释放有顶端和中部断裂两种，以产生突出的方式再生。采用加入0.004%的去氧胆酸钠的PDA固体双层再生培养基再生，再生率可达到1.2%。楸树内生真菌FSN002的原生质体制备和再生体系的建立为通过代谢工程进一步改良菌种，提高内生真菌的抗癌能力奠定基础。 其次我们以楸树内生真菌 FSN002发酵液中的黄色抗癌物质楸灵素为目标，研究了不同酸碱度条件下液相萃取和树脂吸附两种方法浓缩分离楸灵素的初步工艺。 研究发现楸灵素在酸性条件下不稳定，在中性或者碱性条件下相对比较稳定。楸灵素具有中等极性，在水中溶解度较大，不溶于石油醚、正己烷、苯等非极性溶剂。楸灵素具有酸性，在水中和碱反应可生成盐，并进一步电离形成酸根阴离子，因此在水环境中楸灵素存在分子和酸根离子两种状态，水溶液的酸碱性决定了这两种状态的分布平衡：酸性条件下多以分子形式存在，而在碱性条件下多以酸根离子形式存在。 在进行乙酸乙酯的双液相萃取中，当在酸性条件下，楸灵素主要分布在乙酸乙酯相中，亲水性杂质留在水相中；当继续将水相酸碱度调节到碱性后，楸灵素又从乙酸乙酯相转移回水相，疏水性杂质留在乙酸乙酯相中得以分离。通过不同酸碱度下乙酸乙酯的萃取和反萃可以实现发酵液中楸灵素的分离。 实验发现酸性条件下楸灵素以分子状态存在，具有较高疏水性，可以高效吸附到HPD400、HPD450A、HPD200L、AB-8、HD20等反相树脂上，也可以通过氢键作用吸附到聚酰胺树脂上。在碱性条件下楸灵素以带负电的酸根离子形式存在，可以高效吸附到 D380等阴离子交换树脂，而在D72、D151等阳离子交换树脂上则吸附微弱，仅存在由于树脂基质的疏水性导致的反相吸附作用。因此后续实验可以采用亲水基质的阴离子交换树脂来进行楸灵素分离。树脂吸附和初步动态层析实验为后续的柱层析色谱分离纯化楸灵素奠定了基础。