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肝糖异生作用是长期饥饿下机体维持血糖平衡的主要途径,其主要依靠激素的调节,但不适当的调节可引起糖尿病和其他遗传代谢性疾病。糖异生途径中关键限速酶的调节是最基础和最基本的调节方式,其调控主要发生在转录水平,需要多种转录因子协调作用以适应机体不同的代谢和激素状态。在饥饿状态下,血胰岛素水平降低,胰高血糖素和糖皮质激素水平增高,分别通过活化 cAMP 应答元件结合蛋白(CREB)和糖皮质激素受体(GR)而促进糖异生作用。CREB 和 GR可以表达在多器官组织中,但是糖异生作用主要发生在肝脏,极少量发生在肾脏。“翼螺旋” 转录因子家族中的肝脏核转录因子 Foxa 的转录结合位点常与 CREB 和 GR 的结合位点相邻。但糖异生的活化过程中是否需要 Foxa 转录因子以及活化的分子机制尚未阐明。本课题建立了肝细胞转录因子 Foxa2 基因特异性剔除小鼠作为体内研究模型,并以从该小鼠分离培养得到的原代肝细胞为体外研究模型,采用免疫荧光染色技术(IFC)、免疫组织化学染色技术(IHC)、实时荧光定量 PCR 技术(RT-PCR)以及染色质免疫沉淀技术(CHIP assay),较系统、全面地对 Foxa2 在 cAMP 和糖皮质激素介导的肝细胞特异性基因 PEPCK、TAT和 IGFBP-1 转录活化中的作用和分子机理进行了研究,结果发现: 肝细胞 Foxa2 基因特异性剔除小鼠中 PEPCK、TAT 和 IGFBP-1 基因在饥饿状态下 mRNA 表达明显受抑;体外实验结果显示肝细胞中PEPCK、TAT 和 IGFBP-1 基因 mRNA 表达对不同的激素信号刺激,其