论文部分内容阅读
苦楝作为一种生物质杀虫剂和中药,近年来,其化学成分研究的比较广泛,已分离和鉴定了如烃类、柠檬素类、萜类、甾体、氨基酸等化合物,但对其多糖和脂肪酸的研究迄今尚未见报道。为了更好地开发和利用苦楝资源,本文对其果实多糖的提取、纯化、结构鉴定及生物活性进行了研究,同时考察了苦楝籽油的组成成分及其合成共轭亚油酸(CLA)的工艺条件。主要结论如下:1.通过单因素试验和正交试验,得出苦楝多糖(MPS)浸提的最佳条件:提取温度85℃,乙醇浓度80%,时间2h;当料液比为1:20,多糖得率为5.89%,其中提取温度为主导作用。采用DEAE-52纤维素柱、Sephadex G-100柱层析分离纯化,SephadexG-200层析与聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,从MPS中分离出3个分子量均一的组分,其中MPS-1含量约占61.2%。2.利用薄层层析和气质联用对MPS和MPS-1进行了一级结构分析,得出MPS由阿拉伯糖、甘露糖和葡萄糖组成,面积归一化法测得相对百分含量比为3.37:4.86:1.0,MPS-1由阿拉伯糖和甘露糖组成,相对百分含量比1.13:1.0。通过凝胶色谱法测得MPS-1的表观分子量为2.89×105Dal。对MPS-1糖链中糖苷键及相邻糖基连接方式进行分析,由红外光谱知MPS-1的单糖残基以吡喃环和呋喃环的形式存在;由1H-NMR和13C-NMR谱图进一步看出,该多糖以甘露糖为主链,糖苷键构型为α连接;从高碘酸氧化和smith降解产物分析得出,该多糖主链以1→4键连接,支链以1→6键连接,综上所述,其构型如下:3.对MPS-1进行了结构表征,Raman光谱进一步确定其为α构型;从圆二色谱图发现浓度、酸碱度和络合物等因素可影响该多糖的二级结构体系;从X-射线衍射图谱可知MPS-1在2θ为5°至70°范围内无明显的强吸收峰,为无定型态;通过差示扫描量热法得到MPS-1的玻璃化温度为41℃;从TG曲线中得到在加热过程中,有3次大的物质损失过程,而DTG曲线表明55.3℃、273.1℃、415.2℃处失重速度最快。4.在体外抗肿瘤方面,MPS-1对人胃癌细胞BGC-823具有良好的增殖活性,IC100>81.68%,对其它几个细胞抑制不好。在清除羟自由基和过氧化氢方面,MPS-1比MPS具有更好的活性,当剂量为0.6mg时,MPS-1对OH的抑制率可达81.0%;当剂量达到10.24mg时,MPS-1对H2O2的抑制率可达到86.6%;在清除超氧阴离子自由基方面,MPS比MPS-1具有较好的效果。此外,两者的还原力在测定剂量中没有显著差异(P>0.05),且还原力随剂量的增加而升高。5.对苦楝籽油的组成成分和理化性质进行了研究,主要成分为棕榈酸7.17%、硬脂酸4.16%、油酸25.72%、亚油酸62.47%、花生酸0.24%、花生一烯酸0.23%。其中籽油出油率可达31.44%,利用碱法将其合成为CLA,建立了二次旋转回归模型,即y=-25.22685+0.29158x1+0.32346x2-35.99539x3+0.00084875x1x2+0.41808x1x3+1.71583x2x3-0.00087293x12-0.10295x22-355.68649x32,R2=0.9861,由此得到其最佳工艺:反应温度183.8℃,反应时间2.86h,碱浓度6.43%。此外,还考察了合成出产品的氧化稳定性,加入茶多酚能明显抑制CLA的氧化,且有效加入量为80ppm。