白细胞介素12基因转染树突状细胞后和卵巢癌细胞融合作为卵巢癌肿瘤疫苗的初步研究

来源 :中国协和医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wuming66666666
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卵巢癌是死亡率最高的妇科恶性肿瘤。尽管肿瘤细胞减灭手术和联合化疗在临床被广泛应用,但是其生存率却没有明显改善。寻找新的更为有效的治疗手段和方法,是卵巢癌研究中急待解决的问题之一。免疫治疗近年来显示出可喜的苗头。肿瘤的特异性免疫主要是T细胞免疫,而免疫的触发依赖于有效的抗原提呈。树突状细胞(Dendriticcell,DC)是已知功能最强的抗原呈递细胞,高表达MHC Ⅰ类、Ⅱ类分子和共刺激分子,在肿瘤抗原呈递中起着关键的作用。白细胞介素12(IL-12)是由抗原呈递细胞产生的异源二聚体细胞因子,对细胞免疫反应有重要的调节作用,具有明显的抗肿瘤活性。因此,本文旨在研究将IL-12基因转入DC,然后再与自体卵巢癌细胞融合作为疫苗的体外免疫应答效果,此时疫苗不但可以进行抗原呈递,而且还表达肿瘤抗原并具有抗肿瘤活性,为该疫苗进一步的体内研究和可能的临床应用奠定基础。 目的:研究将IL-12基因转入DC,再与自体卵巢癌细胞融合作为肿瘤疫苗的体外免疫应答效果。方法:采用rhGM-CSF和rhTNFα体外诱导脐血DC,通过脂质体转染法和电转染法将IL-12基因转入DC,再使用PEG法将自体卵巢癌细胞与转染IL-12基因的DC融合,用MTT法检测体外免疫杀伤效应。结果:(1)脐血培养7~10天,细胞出现大量毛刺突起,免疫荧光染色显示,脐血DC表达MHC Ⅱ类分子大于90%,并表达较高水平的共刺激分子。(2)将含有p40和p35 cDNA序列的IL-12融合基因克隆入真核载体pcDNA3.1(+),获得IL-12-pcDNA3.1(+)质粒。然后,分别通过脂质体转染法和电转染法将IL-12-pcDNA3.1(+)质粒转染DC细胞,提取被转染DC的RNA,RT-PCR得到cDNA,以IL-12的特异引物进行PCR扩增,
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