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卵巢癌是死亡率最高的妇科恶性肿瘤。尽管肿瘤细胞减灭手术和联合化疗在临床被广泛应用,但是其生存率却没有明显改善。寻找新的更为有效的治疗手段和方法,是卵巢癌研究中急待解决的问题之一。免疫治疗近年来显示出可喜的苗头。肿瘤的特异性免疫主要是T细胞免疫,而免疫的触发依赖于有效的抗原提呈。树突状细胞(Dendriticcell,DC)是已知功能最强的抗原呈递细胞,高表达MHC Ⅰ类、Ⅱ类分子和共刺激分子,在肿瘤抗原呈递中起着关键的作用。白细胞介素12(IL-12)是由抗原呈递细胞产生的异源二聚体细胞因子,对细胞免疫反应有重要的调节作用,具有明显的抗肿瘤活性。因此,本文旨在研究将IL-12基因转入DC,然后再与自体卵巢癌细胞融合作为疫苗的体外免疫应答效果,此时疫苗不但可以进行抗原呈递,而且还表达肿瘤抗原并具有抗肿瘤活性,为该疫苗进一步的体内研究和可能的临床应用奠定基础。 目的:研究将IL-12基因转入DC,再与自体卵巢癌细胞融合作为肿瘤疫苗的体外免疫应答效果。方法:采用rhGM-CSF和rhTNFα体外诱导脐血DC,通过脂质体转染法和电转染法将IL-12基因转入DC,再使用PEG法将自体卵巢癌细胞与转染IL-12基因的DC融合,用MTT法检测体外免疫杀伤效应。结果:(1)脐血培养7~10天,细胞出现大量毛刺突起,免疫荧光染色显示,脐血DC表达MHC Ⅱ类分子大于90%,并表达较高水平的共刺激分子。(2)将含有p40和p35 cDNA序列的IL-12融合基因克隆入真核载体pcDNA3.1(+),获得IL-12-pcDNA3.1(+)质粒。然后,分别通过脂质体转染法和电转染法将IL-12-pcDNA3.1(+)质粒转染DC细胞,提取被转染DC的RNA,RT-PCR得到cDNA,以IL-12的特异引物进行PCR扩增,