蛋白酶活化受体-1单克隆抗体的制备与鉴定

• 作 者: 马文静
• 机 构: 汕头大学
• 出 处: 汕头大学
• 发表日期: 2007年01期
• 关键词: 蛋白酶活化受体-1 单克隆抗体 酶联免疫吸附试验

背景与目的：蛋白酶活化受体-1(PAR-1)是一种的蛋白质，由425个氨基酸组成，含7个疏水跨膜域，为典型的G蛋白偶联受体。PAR-1广泛分布在各种组织细胞上，包括上皮细胞，血小板，内皮细胞，成纤维细胞，单核细胞，T淋巴细胞，成骨细胞，平滑肌细胞，神经细胞，神经胶质细胞及某些癌细胞系等。PAR-1具有广泛的生物学效应，参与诸多疾病的发生发展，因此，我们制备廉价、有效的抗PAR-1mAb具有重要意义。方法：以PAR-1特异性片段为免疫原(13肽)免疫BALB／c小鼠，取免疫小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤NS-1细胞融合。通过间接ELISA法筛选可特异性分泌抗PAR-1 mAb的杂交瘤细胞。采用capture ELISA法鉴定mAb的Ig亚类；通过ELISA、Dot blot、免疫组织化学染色法、流式细胞分析、激光共聚焦扫描显微镜技术鉴定mAb的特异性。结果：获得2株可稳定分泌抗PAR-1 mAb的杂交瘤细胞，其亚型分别为IgM，IgG2b。Dot blot检验表明，mAbs可与膜上的抗原结合。免疫组织化学染色表明，mAb与人扁桃体、结肠组织中的淋巴细胞、包皮组织中的成纤维细胞、肺组织中的巨噬细胞反应呈阳性。流式细胞仪分析显示，2株mAb与人肺腺癌细胞系A549细胞膜上及细胞胞浆内的受体均呈阳性反应。激光共聚焦扫描显微镜观察，A549细胞的胞膜及胞浆内均有荧光标记的阳性反应物。结论：成功地制备抗PAR-1 mAb，为变态反应性疾病，炎症性疾病及其他疾病的研究工作提供了有用的试剂。