莪术油-β-环糊精包合物的研制及其在猪体内的药动学研究

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莪术是姜科植物蓬莪术、广西莪术和温郁金的干燥块根。中医理论认为莪术具行气破血,消积止痛之功效。莪术油为莪术中提取的挥发油。现代医学研究表明,莪术油有较强的抗病毒活性。本研究以莪术油体外抗伪狂犬病毒(PRV)为例,同时以利巴韦林、金刚烷胺、金刚乙胺等三种西药作为对照药物,建立了一套莪术油体外抗病毒研究的方法。采用MTT法测定感染PRV的BHK细胞的存活情况,根据OD值计算药物对BHK细胞的保护率。结果显示莪术油对感染PRV的BHK细胞有极显著的保护作用(P<0.01),其中预防给药的效果最好,保护率达到63.7%,直接作用给药和治疗给药的保护率分别为55.2%和48.7%。 为方便莪术油在兽医临床上的使用,研制出一种适合在兽医临床上使用的莪术油制剂即莪术油-β-环糊精包合物,采用正交设计筛选最佳制作工艺,并对该制剂进行了稳定性以及药物动力学研究。 建立了检测莪术油-β-环糊精包合物中莪术油含量(以莪术油标志性成分之一的吉马酮作为检测目标物)的反相高效液相色谱法。采用高温实验、高湿度实验、强光照射实验和6个月室温留样观察等四方面考察了莪术油-β-环糊精包合物的稳定性。实验结果表明实验期间所有样品的相对含量、外观性状等指标均未见明显变化,表明该制剂符合药剂学要求,可进行口服给药。 选用7头健康猪,按给药剂量30mg/kg.b.w.(以吉马酮计)经猪内服莪术油-β-环糊精包合物和莪术油进行了药物动力学研究。本试验采用随机交叉对照设计,给药间隔为7d,前后体重分别为15.14±0.50Kg和16.45±0.80Kg,经前腔静脉采血,分离血浆,肝素抗凝。血浆样品处理方法如下:准确吸取0.5mL血浆于2mL的塑料离心管中,加入0.5mL乙腈沉淀蛋白和提取药物,涡旋1~2min,4000rpm离心10min,取上清液自动进样30μL,用反相高效液相色谱紫外检测血浆中吉马酮浓度。色谱条件为:Hypersil ODS C18柱,乙腈:水(67:33,v:v)为流动相,流速1 mL/min,柱温35℃,检测波长244nm。在上述检测条件下,吉马酮在0.10~6.4μg/mL浓度范围内有良好的线性关系,其回收率达到90.0%以上。并能与药物其他组分及血浆成分分开,吉马酮色谱峰保留时间大约为12.1min。采用MCPKP药物动力学程序处理血浆的药-时数据,获得相关药动学参数。 猪单剂量内服莪术油的血药-时间数据符合一级吸收二室开放模型,主要药动学参数为:t1/2Ka 0.79±0.04h,t1/2α1.65±0.12h,t1/2β8.00±0.37h,AUC13.93±1.07mg.h.L-1,Cmax2.56±0.11μg/mL,tmax1.90±0.03h。猪单剂量内服莪术油-β-环糊精包合物的血药-时间数据亦符合一级吸收二室开放模型,主要药动学参数为:t1/2Ka 1.21±0.08h,t1/2α2.34±0.14h,t1/2β10.99±0.61h,AUC21.16±0.74mg.h.L-1,Cmax 2.90±0.121μg/mL,tmax2.93±0.09h。对包合物与莪术油的主要药动学参数进行统计学分析,结果表明:t1/2Ka、t1/2α、t1/2β、AUC、tmax等均有显著性或极显著性差异(P<0.05或P<0.01)。莪术油-β-环糊精包合物在猪体内的吸收速度和达峰时间较莪术油慢,在体内分布更广泛,消除更缓慢。以直接内服莪术油为参比,包合物的生物利用度高,达156.39%。本研究表明,研制的莪术油-β-环糊精包合物稳定性好,生物利用度高,具有一定的缓释作用。该制剂经进一步优化完善,将在兽医临床较好的推广应用前景。
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