杜仲胶粒的分离纯化与胶粒结合蛋白的分析

• 作 者: 王惠
• 机 构: 中国农业大学
• 出 处: 中国农业大学
• 发表日期: 2006年期
• 关键词: 杜仲胶粒 分离纯化 橡胶转移酶 胶粒结合蛋白 杜仲

目前发现至少有2000多种植物能够产生橡胶，这些植物局限于少数几个属中。橡胶分子是由大约400～30,000个异戊烯基单体聚合而成的高聚物。天然产胶植物中绝大部分生产顺式天然橡胶，只有少数几种植物生产反式天然橡胶。杜仲是原产于我国的典型的生产高分子反式橡胶的植物，其生产的橡胶称为杜仲胶。研究者已经从产顺式橡胶植物如三叶橡胶树的胶粒上鉴定出橡胶合成相关蛋白，并确认橡胶在胶粒表面合成。但关于杜仲胶的生物合成，研究资料相对匮乏，参考顺式产胶植物中的研究结果，我们推测与杜仲胶合成相关的蛋白很可能存在于杜仲胶粒结合蛋白中。所以，从杜仲植物中分离和纯化胶粒成为我们研究杜仲橡胶生物合成机制的前提。经过不断摸索，我们建立了一种快速简便而又高效的分离纯化杜仲胶粒的方案，通过这种分离方法，我们获得了大量高纯度的杜仲胶粒。并首次对离体胶粒的形态进行了观察。光镜和扫描电镜观察表明，杜仲胶粒呈规则的球形，表面光滑均匀，大小呈两极分布，小胶粒直径2～3μm，大胶粒直径达10μm左右。以获得的高纯度胶粒为原料，通过SDS-PAGE电泳技术，我们分离并分析了胶粒结合蛋白，发现杜仲胶粒中存在多种蛋白，其中分子量为55Kd的蛋白含量最高，其次是15Kd左右的蛋白。另外，我们还尝试CTAB方法提取了杜仲幼叶的总RNA，得到了比较理想的结果，这为将来提供扩增模板奠定了一定基础。