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第一部分：胶质瘤干细胞体外诱导巨噬细胞癌变的实验研究目的：将人胶质瘤干细胞与巨噬细胞共培养，观察胶质瘤细胞与巨噬细胞的相互作用及能否诱导后者发生恶性转化，并鉴定其转化后的生物学表型。方法：取全身表达绿色荧光蛋白的C57BL/6J-NC-GFP裸小鼠，腹腔灌洗得到的巨噬细胞与转红色荧光基因的人胶质瘤干细胞系SU3-RFP直接及间接共培养，建立双色荧光示踪细胞共培养模型，观察胶质瘤干细胞与宿主巨噬细胞相互作用，观察巨噬细胞形态及细胞特性的变化，鉴定其生物学表型的改变。结果：不论是直接及间接共培养，均可见巨噬细胞受肿瘤刺激后发生形态上的变化。其中直接共培养体系中，早期可见巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬。继续传代培养，巨噬细胞由小圆形逐渐变为长梭形，并可连续传代，生长曲线表明此转化的巨噬细胞具有同SU3细胞相似的生长周期及生长速度，具有恶性转化细胞特性。结论：体外双色荧光细胞共培养模型中，人胶质瘤干细胞可诱导宿主巨噬细胞恶性转化，值得进一步深入研究。第二部分：胶质瘤干细胞诱导宿主巨噬细胞癌变的体内研究目的：肿瘤免疫研究表明，进展期肿瘤组织中的巨噬细胞对肿瘤生长起促进作用，本文旨在探索胶质瘤干细胞能否在体内诱导巨噬细胞的癌变。方法：将红色荧光蛋白基因(RFP)转入人脑胶质瘤系SU3，建立稳定表达红色荧光蛋白胶质瘤细胞系SU3-RFP，然后将SU3-RFP接种于表达绿色荧光蛋白基因(GFP)的裸小鼠腹腔，致瘤后取腹水和肿瘤结节培养，细胞单克隆方法得到肿瘤微环境中的各型细胞，并进行传代培养。单克隆所得到绿色荧光细胞(GFP+)，连续传代培养后建立相应细胞株，在荧光显微镜下观察细胞生长情况。细胞爬片后进行HE染色，观察细胞形态。MTT方法绘制此细胞生长曲线。细胞集落形成实验测定此细胞集落形成率。将其接种于裸小鼠右前肢腋下，观察细胞致瘤性。在流式细胞仪上检测GFP+细胞DNA含量，细胞G显带方法对GFP+细胞进行染色体G显带分析，PCR扩增cox基因，对GFP+细胞进行种属鉴定，免疫细胞化学方法检测GFP+细胞巨噬细胞特异性标志蛋白CD68的表达。结果：SU3干细胞球因表达RFP蛋白而发红色荧光。将SU3-RFP细胞接种于GFP裸小鼠腹腔，其致瘤能力100%，荷瘤鼠血性腹水及腹腔肿瘤结节均由发红色荧光的SU3-RFP子代细胞和发绿色荧光的宿主细胞组成。将血性腹水或肿瘤结节的组织块在含血清培养基中培养，都能见到发红色(RFP)、绿色(GFP)和黄色(RFP/GFP融合)三种不同荧光颜色的细胞。单克隆得到的GFP+细胞，体外培养证实其具有无限增殖能力，且兼具下列癌细胞表型：增殖迅速、细胞间接触抑制消失、细胞集落形成率高、高致瘤率。在流式细胞仪上测得其DNA合成能力是正常2倍体鼠淋巴细胞的2.528倍，为超5倍体(2.528×2)。通过G显带可计数染色体条数为92.70±7.15(N=10)，且为端着丝粒；此GFP+细胞可扩增出种属特异性鼠cox基因阳性产物，另外，此GFP+细胞还表达鼠巨噬细胞特异性标志蛋白CD68。结论：在RFP/GFP双色荧光示踪肿瘤模型中，新发现CD68+、具癌细胞特征、源于宿主(GFP+)腹腔巨噬细胞的肿瘤细胞，说明被肿瘤细胞征集来的巨噬细胞不但能促进肿瘤细胞生长，而且自身已癌变，这一发现对进一步研究肿瘤组织重构和肿瘤微环境有重要意义。