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由于中药制剂多长期和反复的用药,许多CYP450代谢酶和转运体活性可被诱导,临床常常引起药物相互作用,为了预防这类相互作用,我们拟考察常用中药对人肝脏中最主要的代谢酶CYP3A4和肠道中主要的药物转运体P-糖蛋白的诱导作用。本文用待测药物与HepG2细胞共培养48小时后与CYP3A探针药物咪达唑仑共孵育,通过测定1-羟基咪达唑仑的生成速率,来比较药物刺激组和空白组的CYP3A4酶的相对活性,从而用于快速的预测药物的诱导作用。同时用real-time PCR法考察了筛选出的有诱导作用的药物刺激HepG2细胞48h后的CYP3A4的表达量的改变。我们用阳性诱导剂利福平对该筛选体系进行了检验,结果显示,利福平使HepG2细胞的CYP3A4酶活性增加1.97倍,使HepG2细胞中CYP3A4基因表达量增加2.3倍。进而我们考察了痰热清注射液等33种临床常用或者长期服用的中药制剂,结果发现麝香保心丸、肝苏颗粒和强肝胶囊对CYP3A4的酶活性影响较强,其中麝香保心丸的诱导作用最强。为了进一步验证该筛选体系的可靠性,我们对麝香保心丸进行了体内和体外的考察,体外HepG2细胞结果显示利福平和麝香保心丸对HepG2细胞的CYP3A4酶活性和表达都呈现剂量依赖的诱导关系。经过6天连续灌胃给予麝香保心丸(6.75mg/kg)的Wistar大鼠的肝微粒体活性比空白组增加了1.57倍,CYP3A1和CYP3A2基因表达分别增加了1.40和2.31倍,说明该筛选体系可用于CYP3A4诱导作用的筛选。鉴于此,我们用HepG2细胞筛选体系进一步探索麝香保心丸诱导作用的活性成分,我们选取了麝香酮、睾丸酮、龙脑、肉桂醛、人参皂苷Rgl、人参皂苷Rf、人生皂苷Re、蟾毒灵、华蟾毒配基、酯蟾毒配基10种主要成分进行体外研究。结果显示,在麝香保心丸含量换算的剂量下,华蟾毒配基(0.03μg／mL)和蟾毒灵(0.01μg/mL)有一定的诱导作用,酶活性分别为空白组的1.14和1.58倍。当华蟾毒配基和蟾毒灵孵育浓度提高,诱导作用也增加。麝香酮曾经被报道对大鼠的CYP3A有诱导作用,但是在本课题的研究中,10-30μg/mL浓度的麝香酮与细胞孵育后显示诱导作用,在含量换算的浓度(0.31μg/mL)下与细胞共孵育48h对细胞的CYP3A4没有诱导作用,其他的单体在测试的浓度下都未显示出诱导作用。提示我们在麝香保心丸的诱导现象中,华蟾毒配基、酯蟾毒配基和蟾毒灵可能在麝香保心丸的诱导作用中起主要的作用,并且他们的结构很相似,很可能有协同的作用。因此在合用含有华蟾毒配基、酯蟾毒配基、蟾毒灵的药物与经过CYP3A代谢的药物时可能产生药物间的相互作用。在本课题的研究中还使用Caco-2细胞Transwell模型考察了麝香保心丸对P-糖蛋白的诱导作用,首先我们用阳性诱导剂B[a]P对模型进行了评价,进而考察了麝香保心丸(30、20、10μg/mL)与Caco-2细胞单层共孵育72小时后罗丹明-123的转运率,结果显示麝香保心丸的诱导作用不明显,不具有统计学意义。然而Caco-2细胞与麝香保心丸(20、10μg/mL)共培养72小时后,细胞中MDR1基因表达分别为空白组的3.28和2.84倍。此外,经过6天连续灌胃给药麝香保心丸(6.75mg/kg)的Wistar大鼠十二指肠mdrla、mdrlb基因表达分别为空白组的1.54和2.88倍。综上所述,我们建立了CYP3A4诱导的筛选体系,并用阳性药利福平对其进行了评价。同时用该筛选体系也评价了临床常用中药制剂,对临床药物的使用具有一定的指导意义。