【摘 要】
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该研究采用基因工程和噬菌体抗体库技术,以人外周血淋巴细胞为抗体基因来源,获得全套人抗体的轻、重链可变区基因片段,拼接成ScFv基因,克隆入噬菌粒载体后构建人源性单链噬菌
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该研究采用基因工程和噬菌体抗体库技术,以人外周血淋巴细胞为抗体基因来源,获得全套人抗体的轻、重链可变区基因片段,拼接成ScFv基因,克隆入噬菌粒载体后构建人源性单链噬菌体抗体库;以HBV核心蛋白抗原作为靶抗原,从构建的人源性单链噬菌体抗体库中富集、筛选出含抗-HBc ScFv基因的阳性克隆,并在体外进行原核表达,通过ELISA、Dot blot和Western blot鉴定确定其特异性,并通过基因序列测定分析特异性阳性克隆插入片段的基因序列;在确定特异性抗-HBc ScFv基因后,将该基因克隆于复制缺陷型腺病毒载体,转染真核细胞,包装含有抗-HBc ScFv基因片段的腺病毒并测定病毒滴度;获得的病毒经感染HepG2细胞,ELISA、Western blot和免疫组化法鉴定细胞中抗-HBc ScFv的表达;最后将确定含有抗-HBc ScFv基因的腺病毒感染HBV体外感染的HepG<,2>2215细胞,使其表达于细胞内,初步观察抗-HBc ScFv在细胞内的抗HBV效果.1.人源性抗-HBc单链噬菌体抗体库的构建.2.人源性抗-HBc ScFv的筛选、鉴定及基因序列测定.3.抗-HBc ScFv真核表达载体的构建、表达及细胞内抗HBV的初步研究.结论: 该研究以血清中抗HBc阳性人外周血淋巴细胞为抗体基因来源,成功构建了人源性噬菌体ScFv库,库容量为1.75×10<'6>;以HBcAg为固相抗原从人源性噬菌体ScFv库成功筛选出特异性抗-HBc ScFv,获得其基因序列,并成功在细菌中诱导表达出特异性抗-HBc ScFv;抗-HBc ScFv基因被克隆于重组腺病毒载体后,在293细胞中成功包装出重组腺病毒,并在感染的HepG2细胞内获得表达;由腺病毒载体介导的细胞内抗-HBc ScFv具有一定的抗HBV作用.
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