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目的：构建ICP0真核表达载体pEGFP／ICP0，转染巨噬细胞，检测ICP0在巨噬细胞中的表达与定位。研究GFP-ICP0融合蛋白瞬时高表达对激活巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α以及NO的影响，为进一步探讨ICP0的致病性提供一定的实验依据。 方法：限制性内切酶双酶切质粒PT7-110，将目的基因连接至真核表达载体pEGFP—C1，构建ICP0真核表达载体pEGFP／ICP0。转染至巨噬细胞后，荧光显微镜观察ICP0在巨噬细胞中的定位，western blotting检测ICP0蛋白的表达。用TNF-α和IL-1β定量试剂盒检测LPS激活的巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1β的水平，用Griess试剂测定经刺激后的小鼠巨噬细胞产生的NO水平。 结果：限制性内切酶双酶切质粒PT7-110，将该目的片断亚克隆至真核载体pEGFP-C1上，所构建的真核表达载体pEGFP／ICP0转染巨噬细胞，荧光显微镜观察GFP-ICP0融合蛋白定位于细胞核，western blotting结果表明pEGFP／ICP0可以在真核细胞中表达大小约为107KD的GFP-ICP0融合蛋白。转染24h后的细胞加入终浓度为100ng／mL的LPS诱导，分别收集诱导后12h、24h、48h细胞培养上清，ELISA法检测上清中细胞因子TNF-α、IL-1β含量的变化，Griess试剂测定上清液中的NO水平。结果表明，GFP-ICP0融合蛋白瞬时表达可上调LPS诱导的巨噬细胞细胞因子TNF-α、IL-1β以及NO的分泌，与各对照组比较，结果有显著性差异(采用方差分析，P＜0.05)。