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本文就鸭和鹅B淋巴细胞刺激因子进行了研究,主要内容如下:
第一部分鹅可溶性B淋巴细胞刺激因子的克隆、表达和活性研究
B淋巴细胞刺激因子是属于TNF家族的,对B细胞分化和存活起着重要作用的一种细胞因子。本实验我们通过RT-PCR的方法从鹅的脾脏中扩增得到了鹅BAFF的全长cDNA序列。鹅BAFF的开放读码框由288个氨基酸组成。鹅的BAFF在氨基酸水平上与鸡、鸭、人、鼠的BAFF的相似性分别为92%,98%,55%,44%。RT-PCR的结果显示鹅BAFF表达与法氏囊,脾脏和胸腺中。在大肠杆菌中表到的鹅可溶性BAFF的分子量大约为19kDa。通过镍柱纯化得到的鹅BAFF在体外可以促进鸡,鸭,鹅的法氏囊B细胞的存活或增殖。同时我们也看到鸡和鸭的BAFF同样也可以促进鸡,鸭,鹅的法氏囊B细胞的存活或增殖。这个结果表明鹅的BAFF在鹅的B细胞的存活或增殖上起着重要的作用;由于在进化上的保守性,鸡,鸭,鹅的BAFF存在着交叉反应。将鸭B淋巴细胞刺激因子和增强型绿色荧光蛋白通过(Gly4Ser)2linker相连接,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达融合蛋白EGFP-dsBAFF;并对该蛋白进行Ni2+-IDA亲和层析柱纯化,纯化的蛋白经检测具有EGFP的荧光活性和dsBAFF的B淋巴细胞促存活活性。
第二部分石斑鱼和猪GILT的研究
GILT在MHCⅡ型抗原呈递和加工中发挥着重要作用,它能催化二硫键的还原,从而有利抗原被蛋自水解酶水解。本实验通过RT-PCR,和RACE的方法从石斑鱼和猪的脾组织细胞中扩增得到石斑鱼GILT(osgGILT)和猪的GILT(pGILT)基因。osgGILT全长cDNA为1066bp,编码260个氨基酸;pGILT全长cDNA为1062bp,编码246个氨基酸。通过Real-time PCR检测osgGILT和pGILT在石斑鱼和猪的各个组织中的表达表明,osgGILT高表达于脾脏和肾脏中,而pGILT高表达于脾脏和血液中。通过LPS刺激过后在猪的脾脏和血液中GILT的表达量明显上调,这表面GILT可能参与LPS刺激的免疫应答。