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在后基因组时代,需要发展新的生物技术来分析复杂系统的蛋白质组分。cDNA噬菌体展示技术是其中十分有效的一种技术。我们利用cDNA噬菌体展示技术,做了以下两项研究工作:①构建了一个容量为6.9×106 pfu的海蛇毒腺cDNA的T7噬菌体展示库,并用羊抗海蛇蛇毒IgG为选择剂对噬菌体展示库进行了4轮淘选,基本排除了非蛇毒蛋白和读码框错误的重组噬菌体,富集了与抗血清特异结合的克隆,由此得到蛇毒蛋白cDNA噬菌体展示库,从中找到了很多海蛇蛇毒蛋白及其基因,如短链神经毒素、长链神经毒素、PLA2类的毒素、类C型凝集素、磷酸酯酶、醛酮还原酶等等,其中有些是第一次发现的。然后从中挑选了四种短链神经毒素在GST融合表达系统中进行原核细胞表达。经过GST亲和柱层析、Precission蛋白酶切割和ICM-Sephadex fast flow阳离子交换层析,得到较高纯度的四种重组神经毒素。对四种重组神经毒素的半致死量和镇痛活性进行了测定,并在计算机模拟的基础上,对短链神经毒素与N型乙酰胆碱受体的相互作用模式进行了探讨。②将乳腺癌细胞cDNA噬菌体展示库用正常人(妇女)血清吸附,进行负淘选;再用乳腺癌病人的血清富集展示乳腺癌相关抗原的重组噬菌体,即进行正淘选。然后将富集后的噬菌体克隆以微阵列固定到蛋白质芯片的片基上,制作成cDNA噬菌体展示芯片。用Cy3荧光染料标记的血清去对芯片上的克隆进行检测,以寻找乳腺癌特异表达的抗原。从本次实验所检测的238个重组噬菌体克隆中发现了两个与乳腺癌病人血清有较强阳性反应的克隆,经ELISA实验初步表明这两个重组噬菌体克隆能与乳腺癌病人血清反应,而不与正常人(妇女)血清反应。对这两个克隆的进一步分析研究正在进行中。 以上两方面的实验结果证明,cDNA噬菌体展示技术可以根据蛋白质的功能来选择和克隆未知的蛋白质基因,这一技术为研究复杂系统蛋白质组分提供了有效方法。此外,实验还证明,cDNA噬菌体展示芯片具有灵敏、微量和高通量淘选特定功能cDNA编码蛋白质的潜力,而且在获得蛋白质的同时也得到了它的基因。