HPV L1在宫颈癌CaSki和HeLa细胞中的表达研究

• 作 者: 付冰冰
• 机 构: 三峡大学
• 出 处: 三峡大学
• 发表日期: 2013年期
• 关键词: 人乳头瘤病毒 宫颈癌 L1蛋白表达

　　目的：本课题应用HPV L1的通用型引物对培养的宫颈癌细胞CaSki、HeLa的mRNA进行扩增,以明确其是否有L1的表达；应用两种针对HPV L1蛋白的抗体进行免疫学检测,从基因和蛋白水平研究HPV L1在两种细胞中的存在情况,了解其与宫颈癌的发生有无相关性,为将L1作为宫颈癌及其它HPV所致肿瘤的免疫检测和免疫治疗的靶标物质的可能提供实验依据。同时比较本课题组制备的兔多抗血清与小鼠抗HPV L1单克隆抗体(可检测HPV1、6、11、16、18、31)在检测HPV16、18、31型时是否有相同的检测能力。
　　方法：(1)培养CaSki、HeLa及HaCaT细胞,提取细胞mRNA及细胞总蛋白。(2)实时定量PCR检测宫颈癌细胞CaSki、HeLa是否有HPV L1 mRNA的表达。(3)应用HPV L1兔多抗血清及小鼠抗HPV L1单克隆抗体(可检测HPV1、6、11、16、18、31)通过免疫印迹实验(Western Blot)方法和免疫组织化学法对宫颈癌细胞CaSki、HeLa中L1蛋白表达情况进行检测。以昆虫细胞-杆状病毒表达系统表达的重组HPV31 L1蛋白作对照。并比较本课题组制备的兔多抗血清与小鼠抗HPV L1单克隆抗体(可检测HPV1、6、11、16、18、31)在检测HPV 16、18、31型时是否有相同的检测能力。
　　结果：(1)成功培养了CaSki、HeLa及HaCaT细胞并提取处于对数生长期的细胞mRNA及细胞总蛋白。(2)实时定量PCR通过HPV L1的通用引物MY09/11、GP5+/6+引物对CaSki、HeLa细胞的mRNA进行扩增结果均为阳性。(3)免疫印迹实验(Western Blot)方法检测结果显示HPV31 L1重组蛋白在55KD处出现条带,CaSki、HeLa细胞在80KD处出现条带；免疫组织化学法检测CaSki、HeLa细胞内细胞浆及细胞质均出现阳性反应。(4)HPV L1兔多抗血清和小鼠抗HPV L1单克隆抗体均在检测HPV 16、18、31型时均为阳性。
　　结论：在mRNA水平和蛋白水平证实了HPV16 阳性的CaSki细胞和HPV18阳性的HeLa细胞内有HPV L1的表达。有望将L1作为宫颈癌及其它HPV所致肿瘤的免疫检测和免疫治疗的靶标物质的可能。证实了本课题组制备HPV L1兔多抗血清具有检测HPV16、18、31的能力,并且与小鼠抗HPV L1单克隆抗体的检测能力相当。