论文部分内容阅读
目的:研究白藜芦醇体外诱导大鼠骨髓基质细胞(Marrowstroma cells，MSCS)的神经元样细胞分化及其可能的机制。方法：采用全骨髓贴壁法分离培养MSCS；用含白藜芦醇的无血清DMEM/F12诱导MSCS分化。倒置显微镜下观察细胞形态，扫描电镜检测细胞表面的初级纤毛，免疫荧光法、免疫印迹法检测nestin、NSE、MAP-2、GFAP、Ac-Tu、Ptc1、Smo和Gli1的表达。结果：1.白藜芦醇诱导后细胞胞体收缩，伸出长突起，类似神经元。免疫荧光显示MSCs及对照组细胞表达神经元NSE蛋白，诱导后细胞NSE、MAP-2蛋白阳性，但诱导前后细胞始终未表达胶质细胞GFAP蛋白。免疫印迹显示MSCs及对照组细胞轻度表达nestin、NSE蛋白，随着诱导时间延长，nestin的表达渐减弱，NSE和MAP-2的表达渐增强，但诱导前后细胞始终未表达胶质细胞GFAP蛋白。2.正常培养的MSCs不表达初级纤毛。经过预诱导或饥饿处理24h后，MSCs表达初级纤毛、蛋白Ptc1、Smo和Gli1，其中Smo和Gli1位于胞浆，Ptc1位于初级纤毛。白藜芦醇诱导后，Smo从细胞浆进入初级纤毛，Gli1从细胞浆进入细胞核，同时，Smo、Gli1蛋白的表达增加。在正常培养时，白藜芦醇不能促使Smo移位以及MSCs向神经元样细胞分化。当MSCs表达初级纤毛时，白藜芦醇以及Smo激动剂SAG可使Smo从胞浆进入初级纤毛，同时伴随MSCs向神经元样细胞的分化和蛋白Smo、Gli1的表达增强；加入抑制剂环杷明后，Smo仍主要表达于胞浆，蛋白Smo、Gli1的表达降低，MSCs向神经元样细胞的分化受抑制。结论：1.白藜芦醇在体外可诱导大鼠骨髓基质细胞分化为神经元样细胞。2. MSCs表达初级纤毛并存在Shh信号，初级纤毛介导Shh信号调控MSCs的神经元样细胞分化。