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几丁质酶可以降解真菌细胞壁的主要成分几丁质，从而抑制真菌的生长，许多转几丁质酶基因的植物也表现出对某些真菌病害的抗性，因此几丁质酶基因在植物转基因抗病育种中具有重要的研究价值。 由褐斑病菌(Marssonina coronaria)引起的苹果早期落叶病是导致落叶程度较重的真菌病害。该病害通常在雨后及湿度较大的6至7月发生，它在东亚（包括中国和日本）给苹果产量造成了很严重的损失。培育抗性品种是解决该问题最经济有效的手段。 本研究从‘富士’叶片中克隆MdChi基因，构建真核及植物表达载体，分别转入毕赤酵母及烟草中，研究MdChi基因的表达状况并探讨该基因在抗真菌病害中的可能作用，为以后通过转基因技术利用该基因提高果树抗病性提供依据。同时利用褐斑病菌孢子悬浮液侵染苹果品种‘富士’、‘秦冠’及其杂交后代‘FQ-2’叶片，在侵染后0h、24h、48h、72h、96h分别取样，对苹果几丁质酶基因MdChi在转录水平上的表达情况进行分析。 获得的主要结果如下： 1.构建了MdChi基因的真核表达载体pPIC9K-MdChi，并将其导入毕赤酵母感受态细胞GS115，用甲醇成功诱导表达了MdChi蛋白。SDS-PAGE分析表明，诱导表达的重组蛋白大小为34KDa，与预期蛋白大小相符。 2.构建了植物表达载体PBI121-MdChi，并通过农杆菌介导法分别将PBI121-GUS、PBI121-MdChi导入烟草，经过Km筛选和PCR检测分别获得5株和8株转化子。RT-PCR分析表明，转MdChi基因的烟草植株均检测到MdChi基因的表达，且表达量有所不同。而未转化株及转GUS基因的烟草均未检测到MdChi基因的表达。接种鉴定，结果表明，有2株（C1、C3）表现出对烟草赤星病的抗性提高。 3.褐斑病菌诱导下MdChi在3份苹果种质的叶片中均有表达，感病品种‘富士’叶片中MdChi基因表达量明显高于抗病品种‘秦冠’及两者杂交后代‘FQ-2’。其中，侵染后24h时‘富士’叶片中的表达量明显上升，48h后又迅速下降。而抗病品种‘秦冠’及‘FQ-2’中MdChi基因表达量在侵染后的96h内未有较大幅度变化，均保持在较低水平。