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盐对于植物的毒害作用主要是由于水分亏缺导致的渗透胁迫以及过量的Na+对细胞重要生化过程的毒害。植物克服盐胁迫的主要机制是Na+的外排和液泡区室化。液泡膜Na+/H+反向转运蛋白利用H+-质子泵和液泡膜H+-PPase产生的跨膜质子梯度可将Na+区室化进入液泡,从而减轻Na+对细胞质的毒害作用。因此,本课题前期实验中,在百脉根和紫花苜蓿中分别过表达了大豆液泡膜Na+/H+反向转运蛋白基因GmNHX1、拟南芥液泡膜H+-PPase基因AVP1,研究结果显示:单独过表达这两种蛋白,在一定程度上提高了植物的耐盐性。
本研究在实验室前期工作基础上继续进行。比较了转单耐盐基因AVP1百脉根T2代种子萌发时的耐盐性与野生型之间的差异。未能获得支持转基因导致耐盐性提高的证据。
在转单耐盐基因紫花苜蓿研究中,本研究进一步在幼苗水平上测试了转单耐盐基因植株耐盐的最大能力,结果表明:转单耐盐基因GmNHX1的P11株系可耐受的最大NaCl盐浓度为180mM,且该株系中目的基因正常表达。
本研究在转单耐盐基因AVP1的转基因百脉根和紫花苜蓿中分别转入大豆液泡膜Na+/H+反向转运蛋白基因GmNHX1,顺利获得了转双基因(GmNHX1、AVP1)的百脉根株系14个和紫花苜蓿株系1个,为进一步研究转双耐盐基因能否更有效地提高百脉根和紫花苜蓿的耐盐性奠定了基础。