论文部分内容阅读
马缨杜鹃(Rhododendrondelavayi Franch.)是杜胃鹃属(Rhododendron)常绿杜鹃亚属(Subgen.Hymenanthes)的多年生高山木本花卉,具有较高的观赏和药用价值,同时作为重要的原始育种亲本,具有重要科学研究与开发利用价值。迄今,马缨杜鹃的全基因组序列已经发布,势必助推杜鹃属植物在分子生物学研究领域的快速发展。然而,有关基因表达内参基因的筛选研究较少,有待进一步充实完善。本研究以马缨杜鹃为研究对象,选取了 11个在木本植物中的常用候选内参基因(GAPDH、Actin、、EF1a、、Tubulina-5、、Ubiquitin、、UEP、、UEC11、UEC2、、TIP41-LIKE FAMILYPROTEIN、Tubulin beta、TATAbindingprotein),采用实时荧光定 PCR技术分析了这11个候选内参基因在马缨杜鹃成年及幼年植株的不同发育时期及受干旱胁迫条件下叶片样品中的表达稳定性。综合内参基因稳定性评价软件qBASE和NormFinde的分析结果,为不同试验样品集筛选最佳内参基因或组合,研究结果如下:1.本研究选取设计的11个常用候选内参基因的引物,经实时荧光定量PCR检测,均能在马缨杜鹃基因组中扩增出相应的目的片段,且扩增特异性和扩增效率(94%-106%)均满足本研究中内参基因筛选的要求。2.本研究通过qBASE与NormFinder两种内参基因稳定性评价软件综合分析11个常用候选内参基因在马缨杜鹃成年植株(成熟叶、花芽、雌蕊、雄蕊及花瓣)与幼年植株样品集中的表达稳定性。研究发现在成熟叶样品集中,最适内参基因组合为GAPDH+Actin;在花芽样品集中,最适内参基因组合为Tubulin-β+UEC1;在不同花组织器官样品集中,最适内参基因组合为EF1a+Tubulin-β;在马缨杜鹃成年植株不同组织部位样品集中,最适内参基因组合为UEC1+ GAPDH+ TIP41+UEP 在马缨杜鹃幼年植株不同组织部位样品集中,最适内参基因组合为GAPDH+ UEC1;在成年与幼年植株所有样品集中,最适内参基因组合为GAPDH+Actin。3.选择表达稳定性较好的内参基因GAPDH检测干旱响应基因NCED1在不同干旱胁迫处理时间下的表达情况,发现NCED1在第9-13天中的表达符合预期趋势。在此基础上,筛选出表达稳定性较好的内参基因组合为Actin+UEC1表达稳定性较差的内参基因组合TIP41+UEC2 通过比较两个内参组合在干旱响应基因NCED1的表达模式,研究结果发现Actin、UEC1是无论是作为组合还是单个内参,NCED1的表达丰度都较高,且符合预期表达趋势。以上研究结果促进马缨杜鹃关于内参基因研究方面的研究进展,也为其他杜昌鹃属植物基因表达内参基因筛选方面研究提供一定的技术参考。