论文部分内容阅读
背景:先兆子痫是临床上造成孕产妇和围产儿死亡的主要原因，而胎盘滋养层细胞增殖、迁移和侵袭功能异常是先兆子痫的主要病理变化。近期研究表明，microRNAs参与了先兆子痫的发病过程。本课题探讨miR-20a对胎盘滋养层细胞JEG-3增殖、迁移和侵袭的作用与机制。 方法:采用原位杂交技术确定胎盘组织中miR-20a的表达;采用qRT-PCR技术检测正常和先兆子痫患者胎盘组织中miR-20a和FOXA1的表达情况，并用Western Blot法检测FOXA1蛋白的表达。培养胎盘滋养层细胞系JEG-3，转染miR-20a的拟似物及其抑制剂，采用细胞计数法检测miR-20a对JEG-3细胞增殖的影响;采用细胞划痕实验及Transwell小室检测miR-20a对JEG-3细胞迁移能力的影响;采用铺有Matrige基质胶的Transwell小室检测miR-20a对JEG-3细胞侵袭能力的影响;Western Blot检测过表达miR-20a对靶蛋白FOXA1的调节。构建FOXA1的siRNA，检测沉默FOXA1后JEG-3细胞增殖、迁移及侵袭能力的变化情况。 结果:原位杂交结果显示miR-20a在胎盘滋养层细胞中有表达;定量PCR结果表明先兆子痫患者的滋养层细胞中miR-20a的表达量较正常孕妇高2.6倍，而FOXA1mRNA的表达量较正常组降低50％;Western Blot结果显示先兆子痫胎盘组织中FOXA1的蛋白表达亦较正常组明显降低。过表达miR-20a后，JEG-3的增殖、迁移和侵袭能力均受到抑制;当同时转染miR-20a的抑制剂AMO-20a后，这一抑制作用消失，而阴性对照序列无明显影响，说明miR-20a对JEG-3细胞的增殖和迁移具有重要调节作用。过表达miR-20a后，JEG-3细胞中FOXA1的表达量显著降低;同时，当应用siRNA将FOXA1沉默时，JEG-3细胞的增殖和迁移均较对照组明显减弱，提示FOXA1是影响JEG-3细胞增殖和迁移的重要分子。 结论:miR-20a可以通过抑制FOXA1的表达而降低胎盘滋养细胞JEG-3的增殖、迁移和侵袭能力，提示miR-20a表达增加可能是胎盘功能异常，导致妊娠高血压发生的原因之一。