【摘 要】
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胰蛋白酶是动物消化道中一种主要蛋白水解酶,属于丝氨酸蛋白酶家族。目前已在甲壳动物及昆虫等无脊椎动物中克隆和鉴定了胰蛋白酶基因。南极磷虾(Euphausia superba)是南大洋
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胰蛋白酶是动物消化道中一种主要蛋白水解酶,属于丝氨酸蛋白酶家族。目前已在甲壳动物及昆虫等无脊椎动物中克隆和鉴定了胰蛋白酶基因。南极磷虾(Euphausia superba)是南大洋生物量巨大的单种生物之一,属于磷虾目浮游甲壳动物。在南极生态系统中,南极磷虾不仅具有丰富的生物资源蕴,而且进化地位特殊。本研究采用RACE技术从南极磷虾中克隆了胰蛋白酶基因(命名为EsTrypsin-1)的cDNA全长,全长为864bp,5’非翻译区(UTR)为14 bp,3’UTR为49 bp,编码区为801 bp,编码266个氨基酸。预测分子量为28.23 kDa,等电点为4.20。EsTrypsin-1的氨基酸序列中有典型的催化三联体结构His74-Asp125-Ser218和特异性的底物结合位点Asp212,以及6个保守的半胱氨酸。同源性分析显示,EsTrypsin-1与甲壳动物南美白对虾(Litopenaeus vannamei)、日本对虾(Marsupenaeus japonicus)的同源性很高,相似性都为87.6%。在系统发育树中,EsTrypsin-1与南美白对虾(L.vanname/)、日本对虾(M.japonicus)聚类在一起。构建重组表达载体并转化宿主菌BL21(DE3)pLysS,用IPTG诱导表达,进一步将重组蛋白分离纯化。检测重组蛋白活性结果:最适催化温度为40 ℃左右,最适催化pH为8.0左右。研究结果表明EsTrypsin-1属于胰蛋白酶家族的成员,重组EsTrypsin-1蛋白具有酶催化活性。
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