一次性表皮细胞分离器的有效性、可操作性及安全性

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表皮细胞是皮肤表层的上皮细胞,其在创伤愈合中起着十分重要的作用,特别是严重烧创伤病人表皮细胞的匮乏与其病程长短、并发症的发生、后期瘢痕的形成均有密切关系。表皮角质形成细胞的主要功能是提供表皮的结构完整性,从而维持对外界的机械屏障。目前,从新鲜皮肤组织中分离的人角质形成细胞及其体外扩增已被广泛用于实验室研究和临床应用。自Rheinwald和Green首次报道连续单层培养人角质形成细胞以来,至今已有30多年的历史,后又经过一些学者探索,目前有多种方法如Tr法、Tr-C法、Dispase法、Lp分离法等。其中最常用的传统常规分离表皮角质形成细胞的方法是用分散酶将表皮和真皮分开,然后将表皮用胰蛋白酶消化得到表皮角质形成细胞。然而该方法有很多局限性,由于细胞回收率低和细胞活力降低,已被证明在从成人组织产生原代细胞方面效率低下,显然不能满足于临床需求。严重烧伤、创伤后的皮肤缺损的患者,自身往往可植皮区域严重不足,急需可足够的覆盖创面的皮肤。因此,将其表皮细胞的分离和培养,以及如何维持它的生理性质,并利用表皮细胞构建动物替代皮肤模型,成为了研究的关注重点。而表皮细胞的分离是其第一步,也是最关键的一步,因为其分离的表皮细胞存活数严重关系到下一步培养的表皮细胞的数目。尽管随着组织工程、基因工程等科技领域的发展,但是表皮细胞分离的有效性仍旧不足。预实验发现使用一次性的表皮细胞分离器,与传统常规皮肤角质形成细胞分离方法相比,大大地节约了时间,细胞存活率也有明显提升。在此,采用随机、对照试验方法研究观察在同样的皮片面积下,一次性使用的表皮细胞分离器与常规皮肤角质形成细胞分离方法的效果不同,并初步探索其差异性。
  目的:探讨一次性使用表皮细胞分离器对表皮细胞分离的效果,评估其可操作性和安全性,并初步分析其提高效率的原因,为烧创伤缺损皮肤创面的治疗提供新方法。
  方法:选择于2018年1月-2019年6月在××医院住院治疗的18-65岁烧创伤患者41例作为研究对象。患者入院后进行营养、补液、改善循环等基础支持治疗、并防治其并发症等,根据患者全身及创面的具体情况,以及结合病原学的证据进行必要的抗感染治疗,同时选择适当的时机进行一次或多次的手术清创,去除坏死组织,术后予以通畅引流、清洁换药。待肉芽组织生长良好后,进行植皮手术,予电动取皮刀取下,厚度为0.2mm、面积大小为2cm*1cm的皮肤,随后将其分为两块约面积1cm*1cm的皮片。将41例患者的两块皮片分为试验组和对照组,试验组(皮片约面积1cm*1cm)使用一次性使用的表皮细胞分离器进行分离,对照组供皮区(皮片大小同试验组)常规皮肤角质形成细胞分离方法,经台盼蓝染色后,于显微镜下分别评价表皮细胞平均总数、死细胞平均数、活细胞平均数及活细胞比例。对数据行Mann-Whitney U检验。
  结果:(1)表皮细胞平均总数:两组表皮细胞分离总数对比,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)死细胞平均数:两组镜下死细胞平均数进行对比,差异无统计学意义(P>0.05)。(3)活细胞平均数:两组镜下死细胞平均数进行对比,差异有统计学意义(P<0.05)。(4)活细胞比例:活细胞数比例=活细胞数/细胞总数,两组活细胞进行对比,差异无统计学意义(P>0.05)。
  结论:一次性使用的表皮细胞分离器用时短,操作简单,对表皮细胞分离的效果高于传统方法。该一次性表皮细胞分离器是一种较理想的表皮细胞分离机器,具有可行性,值得在临床中推广使用。本次实验过程中未出现明显故障,有待进行扩大样本量和多中心的监测以对其安全性有进一步的了解。
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