慢性乙型病毒性肝炎肝郁脾虚和脾胃湿热证转录组学研究

来源 :成都中医药大学 | 被引量 : 24次 | 上传用户:sssmickey
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目的:应用基因芯片技术,研究慢性乙型病毒性肝炎肝郁脾虚证和脾胃湿热证患者差异基因表达谱变化(P<0.05),筛选出与证型相关的差异基因,找到差异基因所表达的基因功能,为慢性乙型病毒性肝炎中医证型客观化研究和辨证治疗提供一定的依据。方法:本研究在前期课题组临床调研及文献研究结果基础上,选取慢性乙型病毒性肝炎临床常见证候肝郁脾虚证和脾胃湿热证进行转录组学研究。以成都市传染病医院、四川大学华西医院、成都中医药大学附属医院收集的慢性乙型病毒性肝炎肝郁脾虚证和脾胃湿热证患者及健康人为研究对象。将慢性乙型病毒性肝炎患者分为肝郁脾虚证组、脾胃湿热证组,同时设立正常人群对照组。提取每例患者外周血液6ml加入已涂布EDTA的50ml离心管中,加入红细胞裂解液,离心,洗涤,加入TRIZOL,将分离出的白细胞转入1.5mlEP管中,得到要研究的样品,将样品用编号编好后放置于-80℃冰箱中保存。及时将样本包装后埋入含有干冰的泡沫箱中,严格密封后,通过快递公司空运至上海伯豪生物技术有限公司。由上海伯豪生物技术有限公司技术人员完成样品质检,全部合格后进入实验阶段,提取RNA,逆转录为cDNA,运用基因芯片进行芯片杂交及扫描,完成基因芯片的制备。最后在SAS软件中完成肝郁脾虚证和脾胃湿热证差异基因的筛选,并对差异基因进行功能显著性分析。结果:(1)按照P-value<0.05的标准筛选出肝郁脾虚证相关的1401个差异表达探针,其中包括592个上调及809个下调。有功能注释的差异基因939条。(2)照P-value<0.05的标准筛选出脾胃湿热证相关的2011个差异表达探针,其中包括807个上调及1204个下调。有功能注释的差异基因1376条。(3)对与肝郁脾虚证相关差异基因功能显著性分析发现:差异基因所表达的功能主要为对外界刺激的反应、碳水化合物的结合、多细胞机体应激反应)、细胞发育、生长发育等。(4)对与脾胃湿热证相关的差异基因功能显著性分析发现:差异基因所表达的基因功能主要为解剖学形态结构的形成、运动调节、细胞迁移、细胞粘附、定位调节、调节稳态过程等。结论:慢性乙型病毒性肝炎肝郁脾虚证与脾胃湿热证存在与证型相关的差异基因。差异基因参与多种基因功能的表达,在两大证型中差异基因所表达的基因功能存在差异。对中医证候的客观化研究具有参考价值。
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