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家蚕发育过程的独特性、品系的多样性、遗传变异的多态性,使其具备成为模式生物的良好潜质,是进行细胞凋亡等研究的理想材料。细胞凋亡是家蚕完成变态发育的重要手段,对凋亡的研究是解析家蚕变态发育机制的重要途径。Caspase家族在细胞凋亡中起着重要的作用,但是家蚕中Caspase基因的相关研究仍处于初级阶段。本实验以NCBI中提交的Bmlce设计特异引物,获得了该基因的一个新的剪接体BmICE-912,并对该基因进行了信息分析和功能研究。同时,对ICE基因4个剪接体间关系也进行了初步探讨。结果如下：1. BmICE-912基因的克隆与序列特征本实验克隆了BmICE-912基因,序列全长912 bp,包含完整的开放阅读框(ORF)912 bp,共编码303个氨基酸,预测分子量为35.1 kD。将克隆的BmICE-912与家蚕基因组序列进行比对,结果表明该基因具有8个外显子和7个内含子。编码蛋白具有Caspase家族成员特有的酶活性中心位点QACRG序列和经典的大小亚基。家蚕ICE基因的4个剪接体很可能是由两个同源基因通过两种剪接方式产生的。2. BmICE-912蛋白具有Caspase-1酶活性我们采用了caspase-1、caspase-3、caspase-9活性检测试剂盒对原核表达产生的BmICE-912目的蛋白进行酶活检测,利用紫外分光光度计测定每一份样品,对得到的405 nm的A值数据分析,结果表明,目的蛋白的活性在加入了caspase-1作用底物后催化产生的pNA量最高。即通过原核表达产生的BmICE-912蛋白具有caspase-1酶活性。3. BmICE-912有抑制细胞凋亡的功能且影响家蚕翅的发育将滞后质粒1180hrs 1000A4-BmICE-912-sv40以一定的浓度梯度转染BmE细胞,UVB处理BmE-SWU1细胞,正常培养24h, TUNEL染色后,经流式细胞仪检查凋亡情况,结果显示：转染组的细胞凋亡率为3.16%,远低于对照组35.74%的凋亡率。这些变化提示,在我们所研究的UVB诱导转染组BmE-SWU1细胞凋亡过程中,BmICE-912基因起到了明显的抑制细胞凋亡的功能。除此之外,利用RANi技术,通过蚕体注射siRNA(BmICE-912),我们发现降低BmE-912基因的表达,影响了干涉组蛾子翅的发育,导致翅明显变小。