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目的
1、Ras作用因子1(Ras interaction/interference 1,Rin1)最初作为Ras蛋白的效应因子被发现的。Rin1基因定位于1q43,编码Rin1蛋白,是小分子三磷酸鸟苷(GTP)酶的鸟苷酸转换因子(GEF),包括若干个功能区域:N-氨基末端的SH2和PR区域、C-氨基末端的RAS联合区域,以及活化Rab5-GEF的Vp59催化区域。Rin1在不同的实体肿瘤中分别扮演了不同的角色,在乳腺癌中Rin1是一种抑癌基因;然而,在胃癌、结直肠癌中Rin1可以促进肿瘤细胞的增殖。
2、本研究通过明确Rin1在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织及其癌旁组织中的表达、病理分布及患者的预后情况,探讨Rin1在NSCLC组织中的表达情况及其与预后的关系。
3、结合TNM分期,综合分析Rin1对NSCLC增殖、侵袭和迁移的影响。
方法
1、NSCLC肿瘤组织标本及相应癌旁肺组织标本来自2007-2011年于中国医科大学附属第四医院行NSCLC切除手术,并排除手术后一个月内死亡的以及有其他脏器转移的、有其他肿瘤史、术前接受过放化疗及其他生物治疗的NSCLC患者。
2、实时定量PCR检测手术切除的NSCLC组织标本Rin1的表达;组织标本在甲醛中固定、石蜡包埋、3μm连续切片。二甲苯和酒精脱蜡后,置于0.1mol/L的柠檬酸缓冲液中微波烘烤。应用抗人Rin1的多克隆抗体进行免疫组织化学染色。
3、临床病理学变量包括性别、年龄、组织分化类型、不同的TNM病理分期以及增殖细胞核抗原-67(Ki-67)。根据手术的时间至因NSCLC死亡或最后一次随访的时间计算其生存曲线,卡方检验验证Rin1的表达与临床病理因素的关系,存活时间曲线(Kaplan-Meier法)计算患者的生存曲线。P＜0.05认为统计学差异明显。
结果
1、在临近肿瘤的肺组织中,Rin1仅在少量的在肺泡上皮细胞和支气管上皮中着色;在90个NSCLC病人标本中,Kin1在48(48/90,53.3%)份标本中强表达;在肿瘤上皮细胞的细胞核及细胞质中,均检测出Rin1的表达,Rin1偶尔位于细胞膜。
2、Rin1的表达与年龄、性别和病理组织分型等无显著性差异。TNM分期Ⅲ-Ⅳ级患者的Rin1表达率明显高于Ⅰ-Ⅱ期患者(65.1%,42.6%;p＜0.05);有淋巴结转移的病人明显高于无淋巴结转移的病人(65.9%,41.3%;p＜0.05)。同时,通过对Ki-67表达的检测研究了Rin1的表达与NSCLC增殖活性的关系:Rin1表达高的NSCLC病人其Ki-67的表达也同样明显升高(P=0.018)。
3、Kaplan-Meier曲线显示:Rin1阳性NSCLC患者的平均生存时间明显低于Rin1阴性NSCLC患者(31.15±21.69,48.31±29.31 months,p=0.043)。然而,多元Cox回归分析显示Rin1并不是影响预后独立的因素,但上述数据足以说明Rin1的表达与NSCLC患者的不良预后密切相关。
结论
Rin1在NSCLC组织中的表达明显高于相应正常的肺组织,并且与NSCLC患者生存率下降有关。同时,Rin1的上调表达有助于NSCLC肿瘤细胞的增殖、发展和转移。这些发现将为进一步界定NSCLC的恶性程度,以及将Rin1用于NSCLC的分子靶向治疗提供实践数据及理论依据。