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目的:有接近15%新组成的家庭会承受不孕症的困扰,大部分是由于分子和遗传因素导致的不孕。虽然有许多基因涉及不育,但是目前只有一小部分基因被确定。遗传因素导致男性不育受到越来越多的关注。尽管做了许多努力,但是临床上只有少数相关基因多态性被确定。这主要是由于男性不育症的多因素的性质,研究设计难度大以及没有好的实验模型的原因,因此迫切需要建立能用于男性不育研究的动物模型。MIJ大鼠的雄性后代中稳定出现不育个体,经遗传测交实验证实为常染色体上的单一隐性基因突变所致。MIJ近交系大鼠有望成为生殖领域研究的良好动物模型。因此突变基因的定位将极大地帮助MIJ大鼠的保种、繁殖及其推广应用。通过前期的表达谱基因芯片筛选,筛选到10个和雄性不育相关的差异表达基因,然而并不清楚是否是由于表达差异基因的突变导致了MIJ大鼠的不育。为了进一步研究MIJ雄性不育大鼠的基因突变情况,本实验对MIJ雄性不育大鼠,MIJ雄性正常大鼠和MIJN雄性大鼠Klhl10(kelch-like family member 10)、Insl3(insulin-like 3)、Acr(acrosin)和Zmynd15(zinc finger,MYND-type containing 15)四个基因进行了克隆测序和序列比对研究。方法:根据搜索RGD(Rat Genome Database)得到大鼠的DNA基因序列,用Primer 5.0软件对Klhl10、Insl3、Acr、Zmynd15四个基因的序列进行引物设计,并送公司进行合成,对MIJ雄性不育大鼠、MIJ雄性正常大鼠和MIJN雄性大鼠基因组DNA分别进行PCR扩增,将扩增出来的特异性片段连接T克隆载体,对连接成功的质粒进行酶切鉴定,将酶切鉴定克隆成功的阳性质粒送公司测序,将三种大鼠的基因片段测序结果进行比对,对各个片段进行拼接分析,以期得到MIJ雄性不育大鼠相对于MIJ雄性正常大鼠、MIJN雄性大鼠的突变所在。结果:1完成了对MIJ雄性不育大鼠,MIJ雄性正常大鼠和MIJN雄性大鼠的Klhl10、Insl3、Acr、Zmynd15四个基因的克隆将PCR产物连接T载体,筛选酶切鉴定连接成功克隆的质粒,完成了对MIJ雄性不育大鼠,MIJ雄性可育大鼠和MIJN大鼠的Klhl10、Insl3、Acr、Zmynd15四个基因克隆。Klhl10、Insl3、Acr和Zmynd15基因分别制备36,2,8,8个克隆,3种大鼠共制备54个克隆。2完成了对MIJ雄性不育大鼠,MIJ雄性可育大鼠和MIJN大鼠Klhl10、Insl3、Acr、Zmynd15四个基因的54个克隆片段的测序将克隆成功的MIJ雄性不育大鼠,MIJ雄性可育大鼠和MIJN大鼠的Klhl10、Insl3、Acr、Zmynd15四个基因的54个克隆片段进行了克隆测序。3对MIJ雄性不育大鼠,MIJ雄性正常大鼠和MIJN雄性大鼠的Klhl10、Insl3、Acr、Zmynd15四个基因的测序结果进行拼接及比对分析Klhl10基因的碱基有16367pb,共制备36个克隆,重叠碱基为3251bp;Insl3基因的碱基有1940pb,共制备2个克隆,重叠碱基为75bp;Acr基因的碱基有6187pb,共制备8个克隆,重叠碱基为646pb;Zmynd15基因的碱基有6614pb,共制备8个克隆,重叠碱基为623pb,通过DNAstar软件进行拼接,并去除多余部分碱基。将MIJ雄性不育大鼠,MIJ雄性可育大鼠和MIJN大鼠Klhl10、Insl3、Acr、Zmynd15四个基因的序列拼接结果用DNAMEN软件进行序列比对,未发现突变碱基。结论:1首次报道了MIJ雄性不育大鼠,MIJ雄性正常大鼠和MIJN雄性大鼠Klhl10、Insl3、Acr、Zmynd15四个基因的DNA序列。2排除了MIJ雄性不育大鼠的突变基因位于Klhl10、Insl3、Acr、Zmynd15四个基因序列的可能性。本实验为进一步对MIJ大鼠突变基因的鉴定研究,确定人类与动物同源的类似基因,为人类男性不育研究提供了科学实验依据。