论文部分内容阅读
目的:骨组织同人的生命一样,需经历生长、发育、衰老、病损等阶段,旧骨去除,新骨形成的过程就是骨的重建。随着年龄的增长,人体的各种机能衰退,人体中的骨量逐渐减少,骨密度降低,这便发生了骨质疏松症（Osteoporosis,OP）。早些年,许多中医学家就论证了五脏六腑与骨质疏松症发生的密切关系,尤其以肾脏最为关键,在临床上也通过补肾等对症方药的方法来减缓此病的发生和发展也取得了令人满意的临床效果。除此之外,近年来的研究还发现,甲状旁腺素（Parathyroid hormone,PTH）可以促进人体对血液中钙离子Ca2+的吸收,使血液中的钙转化为骨骼中的钙,促进骨骼的生长和增强骨的强度,这样可以对骨质疏松症起到预防作用。因此,本研究主要探讨关于绝经后骨质疏松的两个方面,即绝经后骨质疏松中医证型的分布和甲状旁腺素基因多态性与绝经后骨质疏松中医证型的相关性,进而去分析骨质疏松症患者中的不同证型及中国人的相关基因的分布规律与骨质疏松症中医证型的相关性,对于骨质疏松症的易患人群做出早期筛选,降低骨质疏松症的发病率,减少其对人们造成的伤害,提高人们的生活水平。方法:本实验共收集了在山西省人民医院骨科2015年9月份至2016年5月份就诊患者中的300例绝经后的患者,平均年龄为67.4（±5）岁,平均绝经年龄为49.2（±3.6）岁,平均身高为1.56（±0.3）米。且均为正常绝经的患者,而非疾病等原因造成的不自然的绝经。来就诊的患者,均采用本院双能X射线测定骨密度,测定腰椎的平均骨矿含量、L2L4的骨矿含量、左侧髋关节和右侧髋关节的平均骨矿含量,根据测定的峰值判断绝经后骨质疏松症（postmenopausal osteoporosis,PMOP）的患者,并且记录所收集样本中的年龄,身高、体重、生活习惯等资料。由医院中的中医副主任医师以及以上的专家们成立专家组,参照《中医临床诊疗术语症候部分》为标准制定问卷调查表,对所有的患者进行调查问卷,四诊合参,得出每个绝经后骨质疏松症患者的中医辨证分型,且每一个患者的问卷调查应由同一个中医专家完成。对于分组完成后的患者,按照不同的证型组抽血,采用DNA Blood kit（OMEGA）试剂盒提取患者的外周静脉血,提取全基因组DNA。应用Premier5软件设计引物,得出的上游引物为5’-CATTCTGTGTACTATAGTTG-3’,下游引物为5’-GAGCTTTGAA TTA GCA-3’,在94℃条件下变性1分钟,在55℃条件下退火1分钟,在72℃条件下延伸1分钟,最后在72℃条件下继续延伸7分钟,这样重复35个循环,之后选用聚合酶链反应（PCR）扩增,使用1.5%的琼脂糖凝胶电泳观察PCR产物,在凝胶图像分析系统下分析基因型及等位基因的分布频率。结果:在本次研究中发现:1.300例样本中,绝经后骨质疏松患者共211例,占所调查者总数的70.3%,正常组为89例,占总数的29.7%;在患病组中,肝肾阴虚型93例（44.1%）,肾阳虚型55例（26.1%）,脾肾阳虚型42例（19.9%）,气滞血瘀型21例（9.9%）。2.PTH基因型:BB型（387bp,213bp）,Bb型（600bp,387bp,213bp）,bb型（600bp）。分布规律为:基因型BB的有199例,基因型为Bb的有100例,基因型为bb的仅有1例。在患病组中,BB、Bb、bb的基因型分布频率依次为140（66.4%）、70（33.2%）、1（0.4%）;正常组中BB.、Bb、bb基因分布频率为:59（66.3%）、30（33.7%）,在正常组中,没有检测到bb的基因型。两组之间基因分布频率无明显差异（χ2=0.4271,P>0.05）。3.在患病组中,各证型之间的基因型分布频率为:肝肾阴虚组基因型:BB为61例（65.6%）,Bb为31例（33.3%）,bb为1例（1.1%）;肾阳虚组基因型:BB为73例（67.3%）,Bb为18例（32.7%）,bb为0例（0%）;脾肾阳虚组基因型:BB为28例（66.7%）Bb为14例（33.3%）,bb为0例（0%）;气滞血瘀组基因型:BB为14例（66.7%）,Bb为7例（33.3%）,bb为0例（0%）;四组之间的基因分布频率无明显差异（χ2=1.2894,P>0.05）。结论:在本次研究中,绝经后骨质松患者发生率较高,约为调查者的70.3%,并且在四种分型中,肝肾阴虚型最多（44.1%）,气滞血瘀型最少（9.9%）;甲状旁腺素基因的多态性在绝经后的骨质疏松症患者和正常者之间的分布频率无差别,在绝经后骨质疏松症四种中医证型间的分布频率也无差别,不能说明甲状旁腺素基因的多态性与绝经后骨质疏松有相关性,也不能说明其与绝经后骨质疏松的四种辨证分型规律有相关性。