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TTA密码子是高G+C细菌天蓝色链霉菌基因组中最稀有的密码子,对应的亮氨酸密码UUA只能依靠bldA编码的tRNA(Leu)UUA识别并翻译。对大部分天蓝色链霉菌菌株而言,bldA基因和含TTA密码子基因是营养生长的非必需基因。在构建天蓝色链霉菌M145基因缺失突变体的过程中,发现该菌株的bldA只有在加入一个额外拷贝时才能被置换,证明bldA是M145营养生长的必需基因,并且基因组中至少存在一个含有TTA密码子的必需基因。本研究主要是为了鉴定含有TTA密码子的必需基因。
选择了SCD69.13,2SCG1.17,SC10.27,SCK7.13c,SC1C3.22和SCD95A.34c作为目标基因,这些基因大部分在阿维链霉菌中存在同源基因。利用这些基因所在的科斯质粒和PCR-targeting技术分别构建了基因中断载体pHL502,pHL503,pHL505,pHL506,pHL507和pHL518,将这些基因中断载体转入大肠杆菌ET12567去甲基化后通过接合转移转入M145,筛选到对应ORF的基因缺失突变体WJ11,WJ12,WJ13,WJ14,WJ15和WJ17,它们在MS培养基和R5培养基上的表型与野生型M145的表型没有明显差异。说明这些基因都不是必需基因,也不是bldA调节形态分化和次生代谢的靶基因。
当SClC3.21的3’端42个碱基和SClC3.22的5’端740个碱基用阿泊拉霉素抗性基因盒置换后,得到的基因置换菌株WJ1表现为产孢产素推迟并减少,该现象能够被重复。而单独置换SC1C3.21、SC1C3.22或者将将两个基因完整地替换所得到的基因置换菌株WJ16,WJ15和WJ3都表现得与M145相似。其中的机理还有待阐明。
多胺是一类生物体代谢过程中产生的具有生物活性的低分子量脂肪族含氮生物碱,通常认为它对微生物和动物细胞有多种生理影响。在bldA缺陷菌株J1700的培养基中添加外源多胺,能对J1700的形态分化产生一定的影响。精胺的作用强于亚精胺。