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猪圆环病毒(Porcine circovirus)属于圆环病毒科,圆环病毒属,它有两个血清型:PCV1和PCV2。PCV1广泛存在于猪体内和猪源传代细胞系,无致病性;PCV2不仅可以感染猪引起原发性的断奶仔猪多系统衰竭综合征(PWMS),还可以侵害猪的免疫系统,引发仔猪A2型先天性震颤(CT)、成年猪皮炎肾炎综合征(PDNS)和呼吸道疾病综合(PRDS),对世界养猪业危害严重,因而世界各国都非常重视对PCV2的研究。PCV2有两个主要的阅读框ORF1和ORF2。其中ORF2编码的Cap蛋白是病毒的主要结构蛋白,具有型特异性,因此,猪圆环病毒II型Cap蛋白单克隆抗体对PCV2的鉴别诊断有重要意义。本实验的目的就在于用原核表达的纯化复性后的PCV2-Cap融合蛋白免疫小鼠,制备针对Cap蛋白的稳定的、高特异的单克隆抗体。试验结果如下:1.将已经构建好的原核表达载体在大肠杆菌中进行表达,对表达产物进行了SDS- PAGE分析,结果表明该重组蛋白大小约为45ku,与预期结果一致。利用His-bind亲和层析纯化表达的重组蛋白,经紫外线吸收法检测表明,重组蛋白的浓度约为5mg/mL。2.用纯化的重组蛋白免疫小鼠,取其脾脏细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经间接ELISA筛选及连续3次亚克隆,获得了三株能稳定分泌抗PCV2-Cap蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞:1C7A4,4F3F5和4G8F7。杂交瘤细胞株经冻存、复苏及连续传代后仍能稳定分泌单抗,细胞染色体数目均在98~103之间。3.本试验制备所得单克隆抗体的一系列生物学特性鉴定表明,三株单抗1C7A4,4F3F5和4G8F7的Ig亚类鉴定分别为IgG1,IgG1和IgG2b,对应两个不同的抗原表位,均具有针对PCV2病毒天然Cap蛋白的结合表位,具有很强的特异性(其中4G8F7的特异性最强)。本研究成功制备了抗PCV2-Cap蛋白单克隆抗体,为PCV1和PCV2的鉴别诊断方法的研究提供了材料,为后续的试验研究做了充分的准备。