蜈蚣藻多糖及其活性研究

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本论文包括三部分内容:一、对蜈蚣藻(Grateloupia filicina)多糖成分进行了研究;二、对蜈蚣藻多糖部分水解条件及水解产物进行了研究;三、对蜈蚣藻多糖进行活性筛选研究。 第一部分内容包括:对蜈蚣藻多糖成分的研究采用沸水提取,95%乙醇沉淀,透析除去小分子化合物,最后冷冻干燥得到蜈蚣藻粗多糖。蜈蚣藻粗多糖经DEAE Sepharose Fast Flow凝胶柱层析分成七个具有不同电荷性质的多糖部位,用HPGPC法测定其分子量分布后选用合适的分子筛凝胶柱层析,最后分离得到三个均一多糖GFP05、GFP08和GFP15,均为首次从该藻类中分离得到;综合利用各种化学方法(糖组成分析、绝对构型分析、甲基化分析等)和谱学方法(HPGPC、13C-NMR、IR等)对三个均一多糖GFP05、GFP08和GFP15的结构进行了详细的鉴定。 结果表明,GFP15为一琼胶和卡拉胶中间型的硫酸半乳聚糖,分子量1.25×105,主要由1,3连接的β-D-半乳糖和1,4连接的2,3位硫酸基双取代的α-D-半乳糖交替组成,1,3连接β-D-半乳糖的4位和6位上分别有少量的硫酸基取代,1,4连接的半乳糖有少量是α-L-半乳糖,此外还有极少量的木糖、3,6-脱水半乳糖和6-甲基-半乳糖;GFP08和GFP05都具硫酸琼胶结构,其中GFP08分子量8.5×104,主要由1,3连接的β-D-半乳糖和2位硫酸基取代的β-D-半乳糖,以及1,4连接的2,3位硫酸基双取代的α-L-半乳糖,3,6-脱水-L-半乳糖和6位硫酸基取代的α-L-半乳糖组成,另外有少量的丙酮酸基,6-甲基-半乳糖和木糖;GFP05分子量6.7×104,主要由1,3连接的β-D-半乳糖和少量2位硫酸基取代的β-D-半乳糖,以及1,4连接的α-L-半乳糖,2,3位硫酸基双取代的α-L-半乳糖和3,6-脱水-L-半乳糖组成,木糖以端基方式取代在6位,3或4位,另外有少量的丙酮酸基,6-甲基-半乳糖和3-甲基-半乳糖。 第二部分内容包括:为了深入研究蜈蚣藻多糖的结构和构效关系等,对蜈蚣藻粗多糖进行了部分水解研究,以期得到不同分子量的多糖成分。首先对蜈蚣藻粗多糖进行了部分酸水解条件的摸索,选取了较佳的反应条件,1%蜈蚣藻粗多糖水溶液,用0.2M三氟乙酸,65℃水解6小时;并用乙醇分级醇沉、DEAE Cellulose和Sephadex G-25等对水解产物进行了系统的分离纯化,得到两种低聚糖GFP12和GFP116,以及两个较为均一的硫酸多糖GFP263505和GFP263508;综合利用各种化学方法(糖组成分析、绝对构型分析、甲基化分析等)和谱学方法(HPGPC、IR、1H-NMR、13C-NMR、HSQC、TOCSY、1H-1H COSY、HMBC等)对GFP12和GFP116的结构进行了详细的鉴定,同时对GFP263505和GFP263508进行了初步的结构解析。 第三部分内容包括:对蜈蚣藻均一多糖,GFP05、GFP08和GFP15,进行了抗新生血管生成活性、免疫活性和抗肿瘤活性的筛选研究。GFP05和GFP08能抑制鸡胚尿囊膜新生血管生成,但它们的脱硫产物GFP05DS、GFP08DS和GFP15无明显效果;GFP08对ConA诱导的T细胞增殖反应和LPS诱导的B细胞增殖反应均具有一定促进作用,且具有浓度依赖关系,其它多糖效果不明显;GFF05对BEL-7402肝癌细胞生长具有一定抑制作用,其它多糖无明显抑制作用。
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