鼠抗人纤维蛋白单链抗体—尿激酶融合基因的构建及其在中国仓鼠卵巢细胞中的表达

来源 :第一军医大学 南方医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:fanfansis
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该研究在体外全合成了尿激酶原信号肽基因,并应用重组DNA技术将此基因与鼠抗人纤维蛋白单链抗体基因、低分子量单链尿激酶基因融合在一起,构建了编码尿激原信号肽-低分子量单链尿激酶融合蛋白的融合基因,且保证该融合基因处理同一表达相位。将此融合基因分别插入到真核表达载体pcDNA和pMJK中,构建了表达尿激酶原信号肽-鼠抗人纤维蛋白单链抗体-低分子量单链尿激酶融合蛋白的真核表达载体pcDNA3D和pMJK3D。应用磷酸钙共沉淀技术或电击穿等方法,将此真核表达鼠抗人纤维蛋白单链抗体-低分子量单链尿激酶融合白的细胞株CSD-77.该细胞株可稳定表达该融合蛋白,表达量达300IU/10<6>cells/24/h,说明融合基因稳定地整合到中国仓鼠卵巢细胞(CHO)染色体的均质区。采用亲和层析方法从CSD-77细胞培养的上清液中纯化出该融合蛋白,并刊物SDS-PAGE和免疫印迹分析,结果表明该融合蛋白的表观分子量为70kDa,且具有与抗尿激酶抗体结合的能力。经ELISA和溶解圈方法鉴定,证明该融合蛋白具有与DD-二聚体结合的能力和激活纤溶酶原溶解纤维蛋白的活性即具有双功能性。鼠抗人纤维蛋白单链抗体与低分子量单链尿激酶(ScFv-Scu-PA-32K)融合基因的构建及其在CHO细胞中的成功表达,为进一步研究和评价这一双功能融合蛋白的体内外特异性溶栓活性及作为新型导向溶栓制剂的可行性奠定了基础。
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