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前言 端粒是真核细胞染色体末端的特殊结构，它由串联排列TTAGGG碱基的重复序列组成，具有维持染色体稳定性和完整性、固定染色体在细胞内位置的作用。端粒的重复序列在每次细胞分裂后缩短，当长度短到一定程度时，细胞停止分裂进入衰老和死亡。端粒的合成依赖于端粒酶，它能利用自身RNA为模板逆转录合成染色体末端的端粒DNA，从而维持端粒一定的长度。多数正常体细胞不表达端粒酶活性，多数永生化细胞、恶性肿瘤细胞表达端粒酶活性，端粒酶的重新表达在细胞永生化及癌变过程中起着重要的作用。 卵巢癌是妇科恶性肿瘤中死亡率最高的肿瘤，卵巢癌的发展及转移也与端粒酶活性相关。顺铂（DDP）是卵巢癌化疗中最有效的基础药物之一，它是一种类烷化剂的抗肿瘤药物，为细胞周期非特异性药物，可作用细胞周期的任一时相，利于临床的联合用药，但由于DDP的诸多毒副作用及卵巢癌细胞易产生对其耐药性，常使化疗效果不满意。研究发现，人体内必须的营养物质维生素C（VC）可降低抗肿瘤药的毒副作用，并具有抗肿瘤的能力，给各类晚期癌症患者大剂量注射VC，具有显著缓解肿瘤患者症状并延长寿命的作用，但目前对VC抗肿瘤作用机制还不清楚。 本文采用DDP、VC作用于卵巢癌细胞，以细胞端粒酶为靶向研究DDP、VC二者抗肿瘤的作用机制，以及VC对DDP抗肿瘤作用的影响，为肿瘤的临床治疗提供科学依据。 材料与方法 1．材料 1．1材料：CAOV3细胞（卵巢癌细胞株） 互．2试剂和仪器：Rnase、MTI’、SDS、TEMED、Acrylamide、Bi－sacrylamide、CHAPS、AEBSFB、Tas DNA聚合酶、dNTP＊s和 Cx弓物＊厕铂oBR322 DNA／Hae Ill Markers，其它试剂为国产分析纯。 752C型紫外可见光光度仪、相差显微镜3CR－4型高压电泳仪JHZ－95台式恒温震荡箱JLX－800酶标仪、HRSPO520型PCR扩增仪SORVALL高速离心机人O。孵箱、超净台等。 2．方法 2·ICAOV3细胞的培养 2．2 DDP、VC诱导 CAOV3细胞 2．3 Mrt法测定细胞活力 2．斗 蛋白定量：采用酚试剂法测定蛋白。 2．5 端粒酶纯化 2．6 TMP法测定端粒酶活性 结 果 1．细胞毒性试验（M’IT法）DDP、AA—DDP对肿瘤细胞株CAOV3有不同程度的毒性作用，MTh测得IC。。分别是：DDP为8 pmoVL、VC（10 pmol／L）－DDP为 7 pmoUL、VC（50卜moUL）－DDP为4pmol／L；致死剂量分别是：DDP为200pmo＊L、VC（10pmoVL）－DDP为160pmoVL、VC（50pmol／L）－DDP为120pmoVL。DDP浓度为30p moVL时，死亡率是72．9助JC（10pmoVL）－DDP为73．8％、VC（50卜moVL）－DDP为90．3％。 2．DDP对端粒酶活性的影向：当200mol／L DDP作用 CAOV3细胞4小时，即刻收集细胞，药物未对细胞端粒酶活性产生抑制；在细胞经过4小时DDP处理，去除药物再培养20小时，端粒酶活性完全抑制；8 rmol／L DDP作用细胞 24 ／J’时，端粒酶活性部分抑制；当sumol／L DDP作用细胞120／J’时，对端粒酶活性显著抑制 ·2·作用。 3．VC和 VC－DDP对端粒酶活性的改变：10 pmOUL和50pmoUL VC作用 CAOV3细胞60／J’时，都不改变细胞端粒酶活性，但二者可加强对端粒酶活性的抑制作用，且50pmol／L VC加强＊＊P对端粒酶活性的抑制作用比10卜mo＊L＊C更显着。 讨 论 由于抑制端粒酶活性或人为地缩短端粒的长度，都可使细胞活力及不死性受到损伤，耐药的肿瘤细胞端粒酶不发生改变等原因，以端粒酶做为肿瘤治疗的目标已成为研究的热门。化疗是卵巢癌最主要治疗方法，而DDP是卵巢癌诸多化疗药物中最有效的药物之一，其细胞毒性的分子机制为：DDP分子中的一个氯原子与鸟膘吟的第7位氮原子(G－·N＊结合，另一个氯原子可以和蛋白质或一些小分子的亲核基团如－NH卜－SH结合，造成DNA链内或链间交联，或DNA一蛋白交联，形成了铂－DNA络合物，导致＊＊A致命损伤而发挥作用。本实验通过用12O卜mo＊L和speVL DDP处理人CAOV3细胞，结果说明两种浓度的 DDP对端粒酶活性都有抑制作用。细胞经过120卜mol／L DDP处理4／J’时，直接检测无端粒酶活性的变化；但去除DDP经过20小时再培养后端粒酶活性受到显著抑制，这说明＊＊P对端粒酶活性抑制可能是一个时间依赖性过程，即细胞需要经过一定的时间才表现出端粒酶活性受到抑制。实验还发现，用 120pmol／L和spmoVL DDP分别作用于CAOV3细胞，24小时端粒酶活性分别下降88％和48％；而用spmoUL DDP作用细胞 120／J’时后，端粒酶活性也可下降达84％。可见，DDP能有效抑制端粒酶活性，随浓度递增和诱导时间的延长，对端粒酶活性抑制越显著。在晕丸癌的研究中发现：DDP的抑制作用是由于此药物进人细胞后和DNA连接，形成G－Pt－G的连接方式。而端粒和端粒酶RNA复合物（hTR）也富含 ·3·G，因此DDP对端粒酶活性的抑制亦可能是通?