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研究背景肿瘤细胞即使在氧气充足的情况下,仍有很强活性的糖酵解能力,该现象被称为Warburg效应,主要和肿瘤细胞糖酵解过程中酶活性异常增高有关。发现潜在的糖酵解过程中酶的调节机制将有助于我们发现新的肿瘤治疗方法。已有大量研究显示mi RNAs对肿瘤细胞有氧糖酵解有重要调控作用。本课题研究的目的是阐明mi R-449a是否通过调控LDHA从而对肺癌细胞有氧糖酵解起调节作用。实验方法1.用慢病毒感染肺癌细胞上调mi R-449a的表达或用mi R-449a抑制剂下调mi R-449a的表达,应用q RT-PCR和Western blot分别检测LDHA m RNA和蛋白表达的水平。2.通过检测培养基中葡萄糖的消耗,LDHA活力和乳酸的含量,研究mi R-449a和LDHA对肺癌细胞代谢水平的影响。3.通过细胞生长实验、软琼脂单克隆集落形成实验来研究mi R-449a对肺癌细胞增殖能力的影响,及回复LDHA后肺癌细胞的增殖能力是否出现部分回复。通过裸鼠皮下成瘤实验研究mi R-449a对肺癌细胞皮下成瘤能力的影响,以及回复LDHA后肺癌细胞皮下成瘤能力是否部分回复。4.应用q RT-PCR检测29对肺癌组织及对应癌旁组织样本中mi R-449a的表达水平,及LDHA m RNA的表达水平;应用Western blot检测29对肺癌组织样本及对应癌旁组织样本中LDHA蛋白表达水平,分析mi R-449a和LDHA相关性。实验结果1.在肺癌细胞系中,mi R-449a能够降低LDHA m RNA和蛋白表达的水平。2.mi R-449a能抑制肺癌细胞对葡萄糖的消耗,降低肺癌细胞LDHA的活力及乳酸的产生;回复LDHA能够部分回复肺癌细胞葡萄糖的消耗,LDHA的活力和乳酸的产生。3.体外实验表明,mi R-449a能够抑制肺癌细胞的增殖能力和软琼脂单克隆集落形成数,回复LDHA能够部分回复肺癌细胞增殖能力和软琼脂单克隆集落形成数。体内实验表明,mi R-449a能够抑制肺癌细胞裸鼠皮下成瘤能力,回复LDHA能够部分回复肺癌细胞裸鼠皮下成瘤能力。4.人体组织样本分析发现,mi R-449a在肺癌组织较对应癌旁组织表达降低,而LDHA表达水平较对应癌旁组织表达升高,两者呈负相关。结论我们的研究结果表明mi R-449a可通过抑制LDHA的表达,起到抑制肺癌细胞有氧糖酵解和肺癌细胞增殖的作用。通过靶向作用于LDHA抑制肺癌细胞有氧糖酵解有可能成为肺癌治疗的一种新的研究方向。