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目的:异基因造血干细胞移植(hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)后T淋巴细胞的恢复与免疫系统重建、移植物抗宿主病(Graft versus host disease,GVHD)、复发、感染等关系密切。正常情况下,CD4+T细胞不仅辅助CD8+T细胞杀伤肿瘤细胞,还可以协助NK细胞清除和杀灭肿瘤,在抗肿瘤免疫反应中起重要作用。其中初始T细胞通过再循环执行免疫监视功能。而记忆T细胞对抗原的反应强度则数倍于初始T细胞,且更迅速有效。Treg细胞具有免疫无能和免疫抑制的特性,在防止自身免疫病发生、诱导移植耐受及调节肿瘤免疫方面起着重要作用。本研究观察allo-HCST后12个月内CD4+T淋巴细胞不同亚群数量恢复情况,及其与GVHD、复发、感染等临床表现的相关性。方法:1选择2014年2月至2015年11月在河北医科大学第二医院血液内科移植病房进行清髓性异基因造血干细胞移植的35例患者进行回顾性分析。2患者临床情况:1)年龄:中位年龄31岁(3-56岁);女性19例,男性16例。2)疾病诊断及分期:急性白血病(AL)23例,其中CR1期15例,≥CR2期7例,NR期1例。骨髓增生异常综合征(MDS)4例,均为难治性血细胞减少伴原始细胞增多亚型(MDS-RAEB),IPSS-R分期:均为高危组。重型再生障碍性贫血(SAA)7例。不典型慢性粒细胞白血病(aCML)1例。观察截止时间:2015-11-31。3)供受者HLA相合程度:HLA10/10相合同胞供者(MSD)14例,HLA10/10相合非血缘供者(MUD)2例,HLA半相合亲缘供者(haplo-HSCT)19例。4)移植方式:非血缘供者采用外周干细胞移植,亲缘供者采用骨髓+外周干细胞(29/35例)或外周干细胞移植(6/35例)。5)预处理方案:恶性血液病:改良BU+CY或改良BU+CY+ATG/ATG-F;SAA:CTX+ATG+BU±FLU。6)GVHD预防:吗替麦考酚酯(mmf)+环孢菌素a(csa)+短疗程甲氨蝶呤(mtx)。7)患者回输干细胞计数均数±标准差:mnc5.76±1.38*10~8/kg(受者体重),cd34+7.08±3.69*106/kg(受者体重)。8)正常对照组:造血干细胞移植健康供者25例。3标本采集:采集患者移植后+1、2、3、4.5、6、9、12个月及健康供者使用动员剂前外周血4ml;edta抗凝。4流式细胞术(flowcytometry,fcm;美国bd公司facscantoll流式细胞仪)检测cd4+t细胞亚群数量变化。抗体组合:cd4+t细胞:cd3/cd4、初始cd4+t细胞:cd3/cd4/cd62l/cd45ra/cd45ro、记忆cd4+t细胞:cd3/cd4/cd45ro、t调节细胞:cd3/cd4/cd25/foxp3;5统计学:计量资料采用均数±标准差(±s)表示,计量资料的组间比较应用两独立样本的t检验。p<0.05认为有显著性差异。结果:135例患者中,33例获得造血重建,粒细胞植入时间为11.45±1.44天,血小板植入时间为13.21±3.56天。2allo-hsct后,35例患者均发生不同程度的感染,其中肺部感染者12/35例(34.29%);发生巨细胞病毒(cytomegalovirus,cmv)血症者15/35例(42.86%)。死亡10/35例(28.57%),其中原发病复发死亡4/35例(11.43%),重度agvhd死亡4/35(11.43%),2例死于全身炎症反应综合征合并严重肺部感染(5.81%)。3cd4+t细胞亚群的恢复情况3.1cd4+t细胞:cd4+t细胞在移植后+1、+6、+12个月逐渐升高,恢复缓慢。在1个月时明显低于正常值(297.33±195.59/ulvs912.80±323.27/ul,p<0.001),6个月时(405.00±214.90/ulvs912.80±323.27/ul,p<0.001),至12个月时其数值仍低于正常值水平(480.00±169.82/ulvs912.80±323.27/ul,p=0.009),大约恢复到正常值的一半。3.2调节t细胞:treg细胞在移植后恢复亦需较长时间,1个月时(5.54±3.05/ulvs20.83±17.62/ul,p<0.001),9个月时恢复至正常值的50%左右(9.57±3.25/ulvs20.83±17.62/ul,p<0.001),至移植后12个月仍未恢复到正常水平(12.87±3.02/ulvs20.83±17.62/ul,p<0.05)3.3初始cd4+t细胞:初始cd4+t细胞是移植后恢复最慢的cd4+t细胞,1个月时(7.49±5.71/ulvs283.48±189.75/ul,p<0.001),2~3个月逐渐降低,在3个月时达到最低点(4.58±3.00/ulvs283.48±189.75/ul,p<0.001),6个月时逐渐升高至(6.88±3.70/ulvs283.48±189.75/ul,p<0.001),至12个月时远远低于正常(28.05.±26.42/ulvs283.48±189.75/ul,p<0.001),约为正常值的1/10。3.4记忆cd4+t细胞:记忆cd4+t细胞在移植后的恢复快于其他亚群细胞,1个月时(172.71±122.73/ulvs532.00±165.25/ul,p<0.001),6个月时恢复至正常值的50%左右(265.00±85.15/ulvs532.00±165.25/ul,p<0.001),但在12个月时仍低于正常(361.67±121.89/ulvs532.00±165.25/ul,p<0.001)。4cd4+t细胞亚群恢复与agvhd移植后100天内发生Ⅲ-Ⅳ度agvhd者6/35例(17.14%)。其cd4+t细胞、treg细胞、初始cd4+t细胞、记忆cd4+t细胞在监测点均低于未发生者,提示treg细胞、初始cd4+t细胞、记忆cd4+t细胞与agvhd发生呈负相关。5cd4+t细胞亚群恢复与复发35例患者中复发6例(17.14%),血液学复发4例,时间分别为(+31d,+61d,+156d,+170d),分子学复发2例,时间分别为(+60d,+274d)。其treg、记忆cd4+细胞在复发前监测点高于平均水平,提示它们的升高可能与复发成正相关;而初始cd4+细胞则不同,其在复发前的监测点低于平均水平。因病例数少,未做统计学处理。6atg及hla相合程度对cd4+t细胞亚群恢复的影响在移植后1、2、3个月监测点,预处理方案中应用atg的患者,hla全相合组(n=5)与hla半相合组(n=16)比较,监测1-3个月cd4+t细胞亚群恢复,发现前者cd4+t细胞、treg细胞、初始cd4+t细胞、记忆cd4+t细胞数值均高于后者;两组初始cd4+t细胞呈下降趋势。hla全相合组在移植后1-3个月监测点cd4+t细胞、treg细胞、初始cd4+t细胞、记忆cd4+t细胞均高于hla半相合组(p值均<0.05)。可能预示hla全相合较半相合移植免疫恢复迅速且稳定。hla全相合组患者中应用ATG预处理组CD4+T细胞亚群恢复趋势慢于未应用ATG组,但无统计学差异。可能与病例数较少相关。结论:1 Allo-HSCT后CD4+T细胞亚群均恢复缓慢,移植后12个月时,各亚群数值仍低于正常值。其中初始CD4+T细胞恢复最慢,记忆CD4+T细胞恢复相对较快。2移植后100天内Ⅲ-Ⅳ度aGVHD组CD4+T细胞亚群低于无GVHD及轻型GVHD组。3 HLA全相合组CD4+T细胞亚群恢复快于HLA半相合组。4预处理中含ATG的移植受者,HLA全相合组CD4+T细胞亚群恢复快于HLA半相合组。