siRNA干扰胃癌细胞BGC-823 Snail基因表达及调节Snail基因表达对细胞侵袭能力的影响

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目的:观察Snail蛋白、E-cadherin蛋白在人低分化胃腺癌细胞BGC-823及中分化胃腺癌细胞SGC-7901中的表达;观察siRNA扰对BGC-823细胞Snail ,E-cadherin mRNA及蛋白表达的影响;观察调节BGC-823细胞Snail基因表达对细胞侵袭能力的影响。方法:第一部分:应用免疫细胞化学S-P法检测人低分化胃腺癌细胞BGC-823及人中分化胃腺癌细胞SGC-7901中Snail蛋白、E-cadherin蛋白的表达;化学合成针对Snail特异靶点的siRNA 3对(siRNA1,siRNA2,siRNA3)、阴性错义siRNA 1对以及阴性荧光对照siRNA1对,以脂质体2000为载体,转染入BGC-823细胞后,荧光显微镜及流式细胞术观测转染效率;用RT-PCR检测Snail及E-cadherin mRNA表达变化;Western Blot检测Snail及E-cadherin蛋白表达变化;第二部分:分别用外源性TGF-β1诱导及RNA干扰方法调节Snail蛋白表达后,用transwell侵袭实验检测以上干预对胃癌细胞BGC-823侵袭能力的影响。结果:第一部分:免疫细胞化学结果显示:Snail及E-cadherin蛋白在人低分化胃腺癌细胞BGC-823和人中分化胃腺癌细胞SGC-7901中均有不同程度表达,BGC-823细胞Snail阳性表达率显著高于SGC-7901细胞(P<0.05),BGC-823细胞E-cadherin阳性表达率显著低于SGC-7901细胞(P<0.05);荧光显微镜及流式细胞术检测siRNA瞬时转染效率均接近100%。RT-PCR结果显示:目的基因siRNA转染组(siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组)Snail mRNA表达较空白对照组下降(P<0.05);siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组三者间比较,Snail mRNA表达的相对系数差异无显著性(P>0.05);阴性错义、空脂质体及空白对照组三者比较,Snail mRNA表达的相对系数差异无显著性(P>0.05);阴性错义siRNA组Snail mRNA表达与空白对照组比较差异无显著性(P>0.05);空脂质体组Snail mRNA表达与空白对`照组比较差异无显著性(P>0.05);目的基因siRNA染组(siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组)E-cadherin mRNA表达较空白对照组增强(P<0.05);siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组三者间比较,E-cadherin mRNA表达的相对系数差异无显著性(P>0.05);阴性错义、空脂质体及空白对照组三者比较,E-cadherin mRNA表达的相对系数差异无显著性(P>0.05);阴性错义siRNA组E-cadherin mRNA表达与空白对照组比较差异无显著性(P>0.05);空脂质体组E-cadherin mRNA表达与空白对照组比较差异无显著性(P>0.05)。Western Blot检测结果显示:siRNA1组Snail蛋白表达较空白对照组下降(P<0.05);阴性错义siRNASnail蛋白表达与空白对照组比较差异无显著性(P>0.05);siRNA1转染组E-cadherin蛋白表达较空白对照组增强(P<0.05);阴性错义siRNAE-cadherin蛋白表达与空白对照组比较差异无显著性(P>0.05)。第二部分:免疫细胞化学结果显示:TGF-β1诱导组细胞Snail蛋白表达较空白对照组显著增强(P<0.05),siRNA1转染组Snail蛋白表达较空白对照组显著减弱(P<0.05);Transwell侵袭实验结果显示:TGF-β1诱导组细胞侵袭力较空白对照组显著增强(P<0.05),siRNA1转染组细胞侵袭力较空白对照组显著下降(P<0.05)。结论:(1)BGC-823和SGC-7901细胞均不同程度表达Snail及E-cadherin蛋白(。2)Snail-siRNA有效抑制胃癌细胞BGC-823 Snail表达,上调E-cadherin表达。(3)TGF-β1诱导可上调胃癌细胞BGC-823 Snail蛋白表达并增强细胞侵袭能力。(4)RNA干扰Snail基因表达可降低胃癌细胞BGC-823的侵袭能力;(5) Snail基因的高表达可能是胃癌发生侵袭转移的重要分子标志。
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