【摘 要】
：
肿瘤相关巨噬细胞（Tumor-associated macrophages,TAM）是人体一种浸润肿瘤微环境的巨噬细胞,由肿瘤细胞分泌的细胞因子募集而来,是肿瘤组织中存在最为丰富的一种免疫细胞,在肿瘤的发生发展中扮演着重要的角色。TAM受肿瘤微环境多种细胞因子影响,具有一定可塑性,可极化为促进肿瘤进展的M2型或抑制肿瘤进展M1型。M2型被认为是TAM的主要极化形式,主要参与恶性肿瘤的浸润、血管生成
论文部分内容阅读
肿瘤相关巨噬细胞（Tumor-associated macrophages,TAM）是人体一种浸润肿瘤微环境的巨噬细胞,由肿瘤细胞分泌的细胞因子募集而来,是肿瘤组织中存在最为丰富的一种免疫细胞,在肿瘤的发生发展中扮演着重要的角色。TAM受肿瘤微环境多种细胞因子影响,具有一定可塑性,可极化为促进肿瘤进展的M2型或抑制肿瘤进展M1型。M2型被认为是TAM的主要极化形式,主要参与恶性肿瘤的浸润、血管生成和免疫逃逸,与肿瘤患者的生存预后息息相关。嘌呤代谢是人体重要的生化反应过程,通过相应的受体参与调节人体内的免疫反应和释放相关细胞因子,参与了肿瘤的能量代谢和物质交换,是肿瘤与机体相互作用的重要调控者。本研究发现嘌呤代谢是肺腺癌侵袭转移的重要通路,通过建立M1型和M2型极化模型及肺腺癌细胞TAM模型,考察了嘌呤因子磷酸核糖氨基咪唑羧化酶（PAICS）对TAM的调控与机制,并探讨嘌呤因子PAICS对肿瘤发生发展的影响,期望从肿瘤相关巨噬细胞的极化改变为出发点,为干预肿瘤的发生,抑制肿瘤的发展带来新的思路。研究目的:肺癌发生转移与肿瘤微环境密切相关。其中,肿瘤相关巨噬细胞是影响肿瘤发生和发展的重要因素。为了探讨肿瘤相关巨噬细胞在肺癌细胞侵袭迁移中的作用机制,我们通过生物信息学从大数据中分析出来了嘌呤代谢通路,然后通过数据分析和实验验证,确定了靶基因嘌呤因子磷酸核糖氨基咪唑琥珀酰胺合成酶（PAICS）,它是新嘌呤合成的一种生物酶,对合成能量代谢起着关键的作用,是肿瘤能量代谢的重要组成部分,我们将探讨它对与肺腺癌细胞共培养的肿瘤相关巨噬细胞极化的影响。研究方法:首先通过生物信息学数据分析出嘌呤代谢通路,然后我们将THP-1细胞用PMA诱导成静息态巨噬细胞（MΦ）,然后加入LPS和IFN-γ或IL-4诱导成M1型巨噬细胞或M2型巨噬细胞,通过Real-time PCR筛选出我们要研究的嘌呤代谢基因,接下来通过免疫组化的方法检测嘌呤代谢基因在肺腺癌组织上的表达情况,通过Kaplan-Meier（K-M）生存曲线分析评估嘌呤代谢基因的高低表达是否为患者术后生存的危险因素。之后将THP-1细胞用PMA诱导后与肺腺癌细胞A549及PG49共培养,诱导肿瘤相关巨噬细胞（TAM）,我们通过Western-blot,Real-time PCR方法检测敲减后的PAICS及过表达PD-L1对巨噬细胞M1型和M2型特异性标志物的表达影响,通过ELISA方法检测细胞培养基中分泌因子IL-1β、TNF-α、CCL17、CCL22的含量,通过Transwell迁移和侵袭实验检测TAM对肺腺癌细胞的迁移、侵袭能力的影响,通过EMT实验检测TAM对肺腺癌细胞转移能力的影响。研究结果:我们通过数据分析和实验验证,PAICS在肺腺癌细胞中和巨噬细胞中都表达,通过生存曲线分析我们发现PAICS的表达情况是肺腺癌患者长期生存的危险因素。敲减后的PAICS在肿瘤相关巨噬细胞中促进了M1表型分子的表达,减弱了M2表型分子的表达。PAICS在肿瘤相关巨噬细胞中被敲减后,对肺腺癌细胞迁移和侵袭能力减弱,肺腺癌细胞迁移的数量也显著减少,EMT实验结果显示出PAICS促进了肺腺癌细胞从上皮性向间质性转化,增强了肺腺癌细胞的运动能力。我们还发现了PAICS的下游基因程序性死亡配体（PD-L1）在TAM中的作用,在肿瘤相关巨噬细胞中敲减PAICS后,PD-L1表达减弱,M2的标志物CD163表达降低,在进一步过表达PD-L1后,CD163表达上升,Real-time PCR的结果进一步验证了在肿瘤相关巨噬细胞中敲减PAICS后,减弱了M2的标志物CCL17和CD163的表达,使M1的标志物IL-1β和TNF-α的表达上升,过表达PD-L1后M2的标志物表达增强,M1的标志物表达减弱,进一步说明了PAICS通过PD-L1影响了肿瘤相关巨噬细胞极化的改变。研究结论:PAICS高表达是肺腺癌发生淋巴结转移和预后不良的危险因素,PAICS参与维持TAM向M2表型极化和功能。敲除PAICS可抑制TAM分泌肿瘤相关细胞因子并抑制肺腺癌细胞侵袭转移能力。PD-L1是PAICS调控TAM维持M2表型及功能的关键下游基因。
其他文献
目的:吸烟是影响全球人类健康的主要危险因素之一。除了它对肿瘤方面的影响,吸烟还与其他许多病理改变有关,包括心血管、肺和脑疾病。听力损失是一种常见的公共和社会健康问题,它与内在和外在因素都有关。最近的流行病学研究表明,吸烟可以增加听力损失的风险,而在常年大量吸烟的时候,风险往往更高。因此,破解吸烟引起听力损失的机制,对提高吸烟者和暴露在二手烟的不吸烟者的生活质量有很大价值。尼古丁是烟草烟雾中的重要成
研究目的:2型糖尿病（T2DM）是一种以胰岛β细胞质量进行性衰竭伴随糖代谢紊乱进行性加重为主要病理生理特征的代谢性疾病。目前T2DM患病率在逐年升高,已成为全球重大公共卫生负担。尽管研究者们一直致力于胰岛β细胞损伤和恢复的相关机制研究,但迄今为止,关于胰岛β细胞数量减少和功能障碍的全面而明确的机制尚不清楚。目前普遍认为氧化应激、内质网应激、炎性反应等因素是长期持续高血糖诱导胰岛β细胞质量恶化的主要
目的:先天性肾盂输尿管连接处梗阻（Ureter-pelvic junction obstruction,UPJO）是儿童肾积水的常见原因之一,在小儿泌尿外科中多见。沉默信息调节因子1（Silent mating type information regulation 2 homolog1,SIRT1）在肾脏广泛表达,参与肾脏生理和病理的复杂调控作用。泛素-蛋白酶体系统（ubiquitin prot
目的:乳腺癌是发病率最高的女性恶性肿瘤,目前已逐渐演变为一个威胁全球公共健康安全的重要问题。最新评估数据表明,2020年全球乳腺癌新发病例数已达226万。乳腺癌作为一种异质性疾病,预后情况差异较大。约有65-75%的晚期乳腺癌患者会发生骨转移,转移部位多见于胸椎、腰椎、肋骨以及髋关节。骨组织作为一个复杂的生态环境,由成骨细胞、破骨细胞以及多种细胞因子组成,乳腺癌细胞对骨组织的侵犯会导致一系列骨相关
目的:先天性心脏病（congenital heart disease,CHD）是最常见的先天畸形,围产期的发病率和死亡率较高。产前诊断CHD可以帮助孕妇更好地进行临床咨询,完善相关检查,及时转诊,降低围产期的死亡率。而目前CHD的产前检出率较低,在发达国家仅为30%-60%,在发展中国家更低。因此,提高CHD的产前检出率,对优生优育有重要意义。本研究在第一部分回顾性分析了在我院产前诊断中心诊断的胎
目的:人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）是疱疹病毒家族成员之一,是具有庞大且复杂结构的包膜病毒,在人群中感染广泛。病毒自身的蛋白表达、基因组复制、以及病毒颗粒的组装成熟等过程完全依赖于宿主细胞机制。肝X受体（liver X receptor,LXR）是细胞内广泛存在的转录因子,对细胞的生长、发育、分化及新陈代谢都起至关重要的作用。配体激活LXR,产生转录激活和转录
目的:特应性皮炎（atopic dermatitis,AD）是一种慢性炎症性皮肤病,其特点是反复出现的皮疹和剧烈的瘙痒,影响患者睡眠、生活质量及身体和精神健康。AD的病因和发病机制复杂,至今尚未完全明了,遗传因素、环境因素、免疫失常、皮肤屏障功能障碍等均与AD发病相关。而对于AD治疗,近年随着以Dupilumab为代表的生物制剂的应用,为AD患者的治疗寻找到了更有效的方法,但目前AD的复发性和顽固
目的:甲状腺乳头状癌（Papillary thyroid carcinoma,PTC）,作为甲状腺癌中最常见的病理类型,其发病率逐年递增,且淋巴结转移率较高。探究PTC发生侵袭转移的相关分子机制对PTC的诊疗具有重要意义。肌动蛋白细胞骨架的重塑在肿瘤细胞侵袭转移过程中发挥重要作用。肌动蛋白相关蛋白Actin related protein 2（ACTR2）作为Arp2/3复合体中的重要亚基,是新肌
目的:HPV16中的E6/E7蛋白是肿瘤发生发展中的主要致癌基因,且E6/E7的长期持续感染可导致肺癌发生。已有研究发现,E6蛋白主要通过降解p53基因来抑制细胞凋亡,E7蛋白主要通过抑制视网膜母细胞瘤蛋白（p Rb）来促进细胞增殖。因此,由E6和E7蛋白调控的信号通路在肿瘤发生过程中可能并不完全相同,然而两者在肿瘤调控机制中的区别却很少有报道。肝激酶B1（LKB1）是一种抑癌基因,是体内多种肿瘤