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恶性淋巴瘤是严重危害人民健康的常见血液系统恶性肿瘤。高剂量化疗联合自体骨髓移植是恶性淋巴瘤治疗的一个有效手段,但自体骨髓移植物中残留有恶性淋巴瘤细胞及自体骨髓缺乏移植物抗淋巴瘤效应。因此,净化骨髓移植物中的恶性淋巴瘤细胞对降低自体骨髓移植后恶性淋巴瘤的复发有重要意义。光动力学疗法（PDT）应用于恶性淋巴瘤的体外净化未见报道。ZnPcS2P2是一种金属酞菁配合物,是我国合成的一种新型光敏剂。我们的前期研究表明了ZnPcS2P2介导的PDT （ZnPcS2P2 -PDT）可对K562细胞、HL-60细胞具有显著的杀伤作用,对骨髓移植物中掺入的白血病细胞有较好的净化作用。但ZnPcS2P2–PDT是否对恶性淋巴瘤细胞也有作用则未见报道。本实验以滤泡性淋巴瘤细胞株su-DHL-4细胞为模型,研究ZnPcS2P2–PDT对该细胞的杀伤作用及其机制,从而为以后ZnPcS2P2–PDT应用于恶性淋巴瘤自体骨髓移植物的体外净外奠定实验基础。PDT治疗肿瘤的基本原理:光敏剂在接受特定波长的光能后,通过光化学反应和能量传递过程,将光能转化为分子内能。在有氧条件下,可产生多种活性氧物质,使细胞的结构和功能受到严重影响,从而干扰肿瘤细胞的生长并导致其死亡。活性氧成分寿命极短,只对几十纳米范围的生物大分子起作用。而细胞直径在微米数量级。所以研究光敏剂的作用靶点,既光敏剂在细胞中定位的对揭示光动力学疗法的机制有重要意义。激光共聚焦显微镜（laser scanning confocalmicroscope , LSCM）是在荧光成像基础上加装激光扫描装置,利用计算机进行图像处理,使用不同波长的激光激发荧光探针,从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图像。利用激光共聚焦显微镜和特异的细胞器探针可以得到ZnPcS2P2在细胞中的精确定位,明确其在细胞中作用靶点。本文的研究内容主要包括:一、ZnPcS2P2 -PDT对su-DHL-4细胞增殖的作用调整细胞浓度为5×106/ml,接种于96孔培养板,每孔200μL细胞悬液,分别加入终浓度为0.125、0.25、0.5、1.0、2.0μg/ml的ZnPcS2P2,孵育5h后光照;同时设立溶剂对照组、光对照组、含2.0μg/ml ZnPcS2P2的光敏剂对照组。光照条件:用670nm激光以53mW/cm2的功率密度、2.1J/cm2的能量密度照射。将处理后的细胞浓度调整为2.0×105/ml接种于96孔板,孵育48h后, MTT比色法检测ZnPcS2P2-PDT对su-DHL-4细胞增殖的影响。二、ZnPcS2P2–PDT对su-DHL-4细胞凋亡的作用0.25μg/ml、0.5μg/ml、1.0μg/ml的ZnPcS2P2与su-DHL-4细胞孵育5h后,光照条件同上。同时设立溶剂对照组、光对照组、相应浓度的ZnPcS2P2对照组。取光照后24h细胞,应用TUNEL、AO/EB复合染色等手段来检测凋亡。三、ZnPcS2P2在K562细胞、HL-60细胞、su-DHL-4细胞中定位研究K562细胞、HL-60细胞、su-DHL-4细胞常规培养,取对数生长期细胞,5x106/ml细胞与1ug/ml的ZnPcS2P2孵育5h。与ZnPcS2P2共孵育的细胞在完全避光条件分别与线粒体探针Rhodamine123、溶酶体探针LysoTracker DND-26、内质网探针DIOC6（3）共孵育。前二种探针与细胞共同孵育时间为30 min,后者与细胞共孵育时间为1min,PBS洗3次。各个实验组在激光扫描共聚焦显微镜下观察的细胞器探针荧光图像与ZnPcS2P2荧光图像分别显示为绿色与红色的伪彩色输出。利用直接观察法、伪彩色融合法、波行比较法、相关系数法来分析二者之间的相互关系。取得如下结果:1、不同浓度ZnPcS2P2-PDT组对su-DHL-4细胞均有杀伤作用,与对照组相比均有显著性差别（p<0.01）,并呈ZnPcS2P2剂量相关。达到半数抑制率时的剂量（IC50值）为0.41μg/ml。2、ZnPcS2P2-PDT后24小时,TUNEL显示处理组的su-DHL-4细胞可发生凋亡。0.25μg/ml、0.5μg/ml、1.0μg/ml组的ZnPcS2P2-PDT的su-DHL-4细胞凋亡率分别为4.4%、13.9%、23.6%。AO/EB复合染色可见处理组的su-DHL-4细胞核内染色质浓缩聚集或成碎片,呈现凋亡表象。上述结果提示ZnPcS2P2-PDT可诱导su-DHL-4细胞凋亡。3、利用荧光探针的细胞器特异性分布确定ZnPcS2P2在细胞器中的位置,通过直接观察法、伪彩色融合法、波行比较法、相关系数法表明ZnPcS2P2定位于K562细胞、HL-60细胞、su-DHL-4细胞中的线粒体、溶酶体、内质网中。结论:1、ZnPcS2P2-PDT可抑制人滤泡性淋巴瘤细胞株su-DHL-4细胞增殖并诱导其凋亡;2、ZnPcS2P2定位于K562细胞、HL-60细胞、su-DHL-4细胞中的线粒体、内质网、溶酶体中。