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甲状腺癌是人体内分泌系统中最常见的恶性肿瘤,最近几十年来其发病率不断升高,已成为中国和美国女性第五大常见的恶性肿瘤,从而受到医学界的广泛关注。甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)是其最常见的病理类型,总体治疗效果及预后相对良好,但其中晚期及高危亚型患者的治疗效果依然不佳,甲状腺癌手术后大多需要甲状腺抑制或替代治疗,对患者的生活质量造成较大影响。因此对PTC发生发展的分子机制及临床治疗方法的研究是非常必要的。凋亡蛋白酶活化因子1(apoptotic protease activator 1,Apaf-1)是线粒体依赖的凋亡通路中一个核心蛋白,目前认为,该通路的抑制与肿瘤的形成与发展正相关。研究表明Apaf-1在多种肿瘤中表达水平降低,并且与肿瘤细胞的增殖、凋亡以及耐药具有相关性。经检索国内外相关文献发现其在PTC中的研究未见报道,作为一种分化相对良好的内分泌肿瘤,PTC与Apaf-1表达及功能的关系研究可对PTC中线粒体依赖的凋亡通路研究提供新的证据。本研究探讨Apaf-1在PTC组织中表达量的变化,以及其对PTC细胞增殖、凋亡、迁移的影响,探究上调和下调Apaf-1表达量后其介导的caspase凋亡通路的改变,为PTC发病的分子机制提供新的参考依据。本课题应用实时Real-time PCR、Western blot及免疫组织化学方法检测比较甲状腺乳头状癌和癌旁组织中Apaf-1在mRNA及蛋白质水平的差异表达情况,并分析其表达与PTC临床病理学特征的关系;采用Real-time PCR及Western blot比较甲状腺乳头状癌细胞株CGTHW-3和正常甲状腺细胞株Nthy-ori 3-1的Apaf-1表达情况;通过siRNA和表达质粒分别下调及上调CGTHW-3细胞的Apaf-1表达量,验证Apaf-1对细胞增殖、凋亡及迁移能力的影响。结果显示:在PTC组织中,Apaf-1的mRNA和蛋白表达量明显低于癌旁组织(P<0.05),临床病理特征分析显示Apaf-1表达与肿瘤患者的性别、年龄、肿块大小、淋巴转移情况及TNM分期未发现有统计学意义的差别(P>0.05);细胞实验表明,CGTHW-3细胞的Apaf-1的表达较Nthy-ori 3-1的低(P<0.05);下调Apaf-1表达增强了CGTHW-3细胞增殖活性(P<0.05),而上调Apaf-1表达则显著减弱了CGTHW-3细胞增殖活性(P<0.05)以及增强了细胞凋亡比例(P<0.05),然Apaf-1表达调节均未对细胞迁移能力产生明显影响(P>0.05)。我们进一步分析了Apaf-1低表达及高表达时caspase-9、caspase-3、caspase-6、caspase-7蛋白表达的变化情况,结果表明上述4种caspase蛋白表达量均与Apaf-1表达呈正相关性,因此可以推测Apaf-1是通过活化caspase通路蛋白促进细胞凋亡,同时其对细胞增殖活性的作用可能也是通过凋亡通路的改变延长或者缩短了细胞生存时间,进而对细胞增殖产生影响。