【摘 要】
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强致病性的甲型副伤寒沙门菌、鼠伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌Ⅰ相鞭毛抗原的血清型分别为a、i、c。针对这三种沙门菌Ⅰ相鞭毛抗原H1-a、H1-i、H1-c的编码基因设计三对扩增引物
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强致病性的甲型副伤寒沙门菌、鼠伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌Ⅰ相鞭毛抗原的血清型分别为a、i、c。针对这三种沙门菌Ⅰ相鞭毛抗原H1-a、H1-i、H1-c的编码基因设计三对扩增引物。首先,利用常规PCR技术扩增出三段Ⅰ相鞭毛抗原基因,再利用引物上的Linker和重叠延伸PCR扩增技术将此三段抗原决定区基因序列串联,获得鞭毛重组基因。构建鞭毛重组基因的原核表达载体pET-28a-F,并将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21株。表达菌在终浓度为1mmol/L的IPTG,37℃下诱导6h后,SDS-PAGE电泳分析得到鞭毛融合蛋白大小约为95Ku,表达量约为11.2%。含有目的蛋白的包涵体经初步纯化后,免疫豚鼠获得血清抗体。琼脂扩散试验和间接ELISA测定抗体效价可达到1:512000,此时抗体的敏感性为8μg/mL;血清抗体稀释10000×时对甲型副伤寒沙门菌、鼠伤寒沙门菌、猪霍乱沙门菌检出值分别为:1.35×10~5个/mL、1.63×10~5个/mL、2.31×105个/mL;用10种沙门菌和15种非沙门菌属的其他食物中毒菌做免疫交叉反应,结果显示特异性较好,同时抗体显示很好的广谱性,即能和相同鞭毛血清型的沙门菌菌群反应。纯化血清抗体并进行胶体金免疫层析实验,对试纸条检测方法做了初步研究,为食品中沙门菌的快速检测技术奠定基础。
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