纤维素降解菌的分离筛选、酶学性质及其液体发酵条件的研究

来源 :吉林农业大学 | 被引量 : 5次 | 上传用户:tcwf2009
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纤维素是地球上分布最广且最廉价的多糖物质,也是自然界既丰富又不断再生的有机物质,然而它们大部分被丢弃或烧掉,并未得到有效利用。这不紧破坏自然界的生态平衡,污染环境,且能量利用率低,严重浪费了宝贵的物质资源。自然界中的纤维素大多是由微生物降解,因此对纤维素降解菌的筛选和人工改造是未来对纤维素利用的一种重要途径。本论文主要内容和结论如下:从富含腐殖质的土壤样品中分离到一批纤维素分解菌株。通过初筛得到6株透明圈较大且使滤纸产生崩解的菌株,将这6株菌株再进行液体发酵复筛,得到1株生长速度较快、酶活较高的菌株,采用形态鉴定和分子鉴定相结合的方法,最终确定其为青霉,并命名为C2-10。酶活测定结果表明该菌株的羧甲基纤维素酶活(CMCase)为65.89U/mL,滤纸酶活(FPase)为18.10U/mL,p-葡萄糖苷酶活(βGase)为39.08U/mL。在产酶条件及酶学性质初步研究中,菌株C2-10的CMC酶的最适反应温度为50℃,最适反应pH6.0;滤纸酶的最适反应温度为60℃,最适反应pH6.0。用不同温度处理1h后,菌株C2-10的CMCase和FPase均在30℃-50℃间保持较好稳定性;用不同pH处理2h后,菌株C2-10的CMCase在pH4.0-7.0范围内的稳定性较好,而FPase在PH5.0-7.0范围内较为稳定,结果表明菌株C2-10对热和酸表现出较好的稳定性。Ca2+、Fe2+、Mg2+和Mn2+对CMCase和FPase均有促进作用,C2+、Zn2+、Cu2+和Pb2+对CMCase和FPase有抑制的作用,Na+和K+对CMCase和FPase基本没有影响。通过单因素和正交试验,对菌株C2-10的培养基成分和发酵培养条件进行优化,确定其最优液体发酵条件为:CMC-Na与麸皮比例为9:1,蛋白胨与(NH4)2SO4比例为3:2,表面活性剂吐温-80添加量为0.015%,培养基起始pH为6.0,培养温度为30℃,发酵时间为5天,通气量为100mL,接种量为6%,摇床转数为180r/min,与此同时,接种年龄为第4天,菌株C2-10的酶活力达到最高,通过对优化前后发酵工艺的比较试验,CMCase、 FPase和PGase分别比优化前提高了1.10倍,1.36倍和1.17倍。通过对C2-10进行原生质体融合试验,得到当混合酶为1.0%蜗牛酶+1.2%纤维素酶+0.4%溶菌酶,菌龄为36h,0.8mol/L的NaCl为稳定剂,酶解时间为6h,酶解温度为30℃,紫外灭活为15min时,对菌株C2-10原生质体的形成与再生最有利。然而在C2-10的融合试验中,并未得到的理想的融合子,试验有待于进一步研究。
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