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甜叶菊(Steviarebaudiana(Bertoni)Hemsl)为国内外著名的优质糖科植物，富含多种微量元素及营养成分，既是极好的糖源，又是良好的营养来源。莱鲍迪苷A(RebaudiosideA，RA)为甜叶菊的主要成分之一，属四环二萜类衍生物，具有高甜度、低热量的特性，对龋齿、高血压、糖尿病、肥胖症有一定治疗作用，同时也是一种新型的甜味剂，具有良好的开发前景。
基于本实验室的前期研究成果，本实验工作主要包括对RA单克隆抗体的优化制备，并以获得的RA单克隆抗体建立了酶联免疫吸附分析法和免疫印迹分析法两种检测方法，以期对各种甜叶菊样品中RA的含量进行检测和评价。
主要的实验结果如下:
(1)采用高碘酸钠法合成包被人工抗原RA-OVA和免疫人工抗原RA-HSA，经MALDI-TOF-MS鉴定，载体蛋白连接的半抗原数分别为5和14个。
(2)用免疫人工抗原RA-HSA免疫4只Balb/C小鼠，加强免疫4次后，对4只小鼠的脾细胞分别进行细胞融合。
(3)使用PEG-1450介导小鼠免疫脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合。对杂交瘤细胞进行培养，进行第一次有限稀释时取阳性孔培养液进行RA和ST的竞争ELISA检测，挑选交叉反应率低的阳性孔继续有限稀释，最终获得2株稳定分泌单克隆抗体且与ST交叉反应率较低的杂交瘤细胞。
(4)选择特异性较高的杂交瘤细胞株1AE12B7B1H5E1制备小鼠腹水，经过ProteinG亲和层析柱分离纯化得到单克隆抗体。冻干后得抗RA单克隆抗体29.1mg，平均产量为4.15mg/mL，单抗的分子量约为140kDa。
(5)1AE12B7B1H5E1单克隆抗体性质检测结果为RA的IC50为1.287μg/mL，与ST的交叉反应率为12.7％，与其余结构类似物的交叉反应率均小于0.01％，亲和常数分别为1.486×10-6mol/L，最低检测限0.158μg/mL。
(6)利用制备的单克隆抗体建立竞争ELISA法，检测甜叶菊样品提取液中RA的含量，结果与HPLC法的检测结果基本一致。
(7)建立以PVDF膜为载体基于RA单克隆抗体的免疫印迹法，并对甜菊叶样品进行检测，所得结果与HPLC法结果误差率为12.04％。